基于酿酒酵母的多片段质粒的构建

作     者：汤雅萍 程毅 王吐虹 陈佳 高春生 郭利桃 宋志强 唐超 严准 李智敏 TANG Yaping;CHENG Yi;WANG Tuhong;CHEN Jia;GAO Chunsheng;GUO Litao;SONG Zhiqiang;TANG Chao;YAN Zhun;LI Zhimin

作者机构：中国农业科学院麻类研究所湖南长沙410205 

出 版 物：《湖南农业大学学报（自然科学版）》 (Journal of Hunan Agricultural University(Natural Sciences))

年 卷 期：2023年第49卷第4期

页      面：421-427页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：中国农业科学院科技创新工程(ASTIP-IBFC-04) 湖南省自然科学基金项目(2015JJ3128) 湖南省植保植检站植物防疫防控科研项目(HNZB202104) 

主　　题：质粒构建 多片段质粒 酵母同源重组系统 

摘      要：为避免现有的多片段质粒构建技术的弊端,提高多片段质粒构建效率,以构建树干毕赤酵母Agglutinin-like基因的敲除载体为例,利用酿酒酵母活体细胞重组系统,一次性将多个外源DNA片段和线性化质粒重组,形成环状质粒。通过引物设计在相互连接的DNA片段之间引入50bp重叠序列,用PCR扩增DNA片段后,与线性化质粒一起转化酿酒酵母,再用PCR和测序等方法鉴定阳性酵母菌落中质粒的正确性。通过本方法构建的多片段质粒正确率高、耗时短。