一种来自乳酸乳球菌的新型氨肽酶A的制备及特性分析

作     者：田鑫 刘金洲 何忠会 陈琳方 刘梦元 TIAN Xin;LIU Jinzhou;HE Zhonghui;CHEN Linfang;LIU Mengyuan

作者机构：湖北大学生命科学学院生物催化与酶工程国家重点实验室湖北武汉430062 湖北中医药大学检验学院湖北武汉430065 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2023年第39卷第8期

页      面：3494-3507页

核心收录：

学科分类：0832[工学-食品科学与工程（可授工学、农学学位）] 08[工学] 083201[工学-食品科学] 

基　　金：国家自然科学基金(30973669) 省部共建生物催化与酶工程国家重点实验室开放基金(SKLBEE2020023) 

主　　题：氨肽酶A 乳酸乳球菌 食品工业 肉类加工 

摘      要：氨肽酶A(aminopeptidase A,Pep A)能特异性地水解N末端为谷氨酸(glutamic acid,Glu)或天冬氨酸(asparticacid,Asp)的肽链,提高蛋白质的水溶性和食物的风味,在食品工业和肉类加工中具有一定的应用前景。本研究采用全基因合成的方式获得了乳酸乳球菌(Lactococcus lactis ***)IL1403氨肽酶A(Lactococcus lactis-Pep A,Lc-Pep A)的编码基因,将该基因克隆并导入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115(His4),在毕赤酵母中实现了Lc-Pep A的高效分泌表达,表达产物经鉴定和纯化制备后,进行了生物学特性的分析。结果表明,Lc-Pep A具有较强的底物特异性,对2种底物谷氨酸对硝基苯胺(glutamicacid-p-nitroaniline,Glu-pNA)和天冬氨酸对硝基苯胺(aspartic acid-p-nitroaniline,Asp-pNA)具有相似的催化活力和酶动力学参数。Lc-Pep A是一种金属蛋白酶,最适反应温度为60℃,最适pH为8.0,具有较宽的热稳定性和酸碱稳定性。金属离子Co^(2+)、Mn^(2+)及Zn^(2+)等对酶活力具有不同程度的激活作用,而Ni^(2+)和Cu^(2+)对酶活力具有强烈的抑制作用。Lc-Pep A对常规蛋白酶抑制剂不敏感,但能被金属蛋白酶抑制剂、EDTA及二硫键还原剂抑制。这些研究为Lc-Pep A的生产和指导该酶的应用打下了坚实的基础。