表达H9N2 AIV双脯氨酸突变HA蛋白的基因Ⅶ型重组NDV的构建及鉴定

作     者：谢文婷 徐婷 杨洁 陈瑞爱 XIE Wenting;XU Ting;YANG Jie;CHEN Ruiai

作者机构：岭南现代农业科学与技术广东省实验室肇庆分中心广东肇庆526238 华南农业大学兽医学院广东广州510642 华农(肇庆)生物产业技术研究院有限公司广东肇庆526238 肇庆大华农生物药品有限公司广东肇庆526238 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2023年第43卷第7期

页      面：1381-1387页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广东省重点领域研发计划资助项目 鸡传染性支气管炎和禽流感病毒样颗粒疫苗的研制及应用资助项目(2021B0707010009) 

主　　题：H9N2亚型禽流感 HA蛋白 脯氨酸突变 新城疫病毒反向遗传系统 

摘      要：构建表达H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 subtype avian influenzavirus, H9N2 AIV)双脯氨酸突变的HA蛋白的基因Ⅶ型重组新城疫病毒(Newcastle disease virus, NDV),为NDV和H9N2 AIV新型二联疫苗的研发提供前期基础。通过对H9N2亚型AIV的HA基因进行分析,将其编码区第403位氨基酸由I突变为P以及第411位氨基酸由V突变为P,并利用反向遗传操作系统,将突变前与双脯氨酸突变的HA插入到基因Ⅶ型NDV病毒弱毒株rDHN3-mF基因组P基因与M基因之间的非编码区,经病毒拯救后获得重组病毒(rDHN3mF-HA/HA-2P)。通过Western blot试验证明重组病毒rDHN3mF-HA-2P可在DF1细胞内表达特异性HA蛋白,且与rDHN3mF-HA相比,经双脯氨酸突变后的HA蛋白表达水平更高。重组病毒rDHN3mF-HA-2P可以在鸡胚中稳定传代,与亲本毒株具有相似的复制特性,保留了rDHN3-mF株在鸡胚中高滴度复制、低致病性等生物学特性。本试验成功构建表达H9N2亚型AIV的双脯氨酸突变HA基因的重组病毒rDHN3mF-HA-2P,将为研发同时防控H9N2亚型AIV毒株和基因Ⅶ型NDV感染的新型高效、廉价多联疫苗奠定基础。