肠道出血性大肠埃希菌菌株及其基因组DNA标准物质的研制及评价

作     者：刘娜 王亚萍 赵琳娜 王学硕 崔生辉 LIU Na;WANG Yaping;ZHAO Linna;WANG Xueshuo;CUI Shenghui

作者机构：中国食品药品检定研究院北京100050 

出 版 物：《中国生物制品学杂志》 (Chinese Journal of Biologicals)

年 卷 期：2023年第36卷第7期

页      面：833-838页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 071005[理学-微生物学] 

基　　金：国家重点研发计划(2018YFC1604303)。 

主　　题：微生物标准物质 肠道致病性大肠埃希菌 基因组DNA 

摘      要：目的 筛选肠道致病性大肠埃希氏菌(enterohemorrhagic Escherichia coli,EHEC)菌株,并将其申报为中国医学细菌保藏管理中心(China Medical Bacterial Species Conservation and Management Center,CMCC)标准菌株;以此标准菌株研制我国自主知识产权的EHEC菌株及其基因组DNA标准物质,并将其申报为国家药品标准物质。方法 依据GB4789.6-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验致泻大肠埃希氏菌检验》,从160株来源于腹泻患者的大肠埃希菌中筛选EHEC菌株,按照CMCC菌株管理规定整理材料将其申报为标准菌株。用其制备EHEC菌液及其基因组DNA溶液,采用冷冻干燥技术分别制备菌株类(103CFU/样品)和基因组DNA类(20 ng/样品)样品各600个。将这两种样品各随机抽取20个进行均匀性检验;并分别于25、37℃条件下存放1、3、5、7 d取样检测运输稳定性,于4℃条件下存放7、14、28 d取样检测短期保存稳定性,于-20℃条件下存放14、28、60 d取样检测长期保存稳定性。组织3家实验室对两种样品进行协同标定。筛选20种食品基质对菌株样品进行使用效果评价。结果 从160株来源于患者的大肠埃希菌中筛选出1株EHEC菌株,最终申报为CMCC(B)43207标准菌株。均匀性检验中,F_(菌株样品)=0.662 0.05;20个基因组样品的eae、stx1、stx2基因均为阳性。于25和37℃保存7 d、-20℃保存60 d、4℃保存28 d后,菌株样品活菌含量均为10^(3)CFU/样品,基因组样品的eae、stx1、stx2基因均为阳性。随机抽取的EHEC菌株和基因组DNA样品经3家实验室鉴定均为EHEC,活菌含量均在10^(3)CFU/样品的水平,且eae、stx1、stx2基因均为阳性。在20种食品基质中加入样品后均可检出,本底对照均未检出。EHEC菌株及其基因组DNA样品均纳入我国药品标准物质,编号分别为80024和80056。结论 研制的具有自主知识产权的EHEC菌株及其基因组DNA标准物质可提高EHEC检验的时效性,弥补了我国此方面空白。