miR-210-3p通过自噬调控MC3T3-E1细胞成骨分化的机制研究

作     者：杨玉梅 林青 李小云 叶倩云 张志芬 朱晓峰 杨丽 张荣华 YANG Yumei;LIN Qing;LI Xiaoyun;YE Qianyun;ZHANG Zhifen;ZHU Xiaofeng;YANG Li;ZHANG Ronghua

作者机构：暨南大学药学院广东广州510632 暨南大学中医学院广东广州510632 广东省中医药信息化重点实验室广东广州510632 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2023年第39卷第7期

页      面：1253-1264页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.82074287,No.82274232) 国家重点研发计划项目(No.2018YFC2002501) 广东省中医药信息化重点实验室(No.2021B1212040007)。 

主　　题：骨质疏松症 微小RNA-210-3p 自噬 MC3T3-E1细胞 成骨分化 

摘      要：目的:探讨微小RNA-210-3p(microRNA-210-3p,miR-210-3p)通过自噬对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1成骨分化的影响。方法:(1)采用脂质体转染法构建miR-210-3p过表达或沉默的MC3T3-E1细胞模型,设置阴性对照(negative control,NC)mimic组、miR-210-3p mimic组、NC inhibitor组和miR-210-3p inhibitor组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标及自噬相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(2)用雷帕霉素(rapamycin,RAPA)和3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)分别构建自噬激活和抑制模型,设置control组、RAPA组和3-MA组,Western blot、RT-qPCR和免疫荧光法检测自噬激活或抑制后MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标的变化,茜素红染色法观察矿化结节形成情况。(3)设置NC mimic组、NC mimic+RAPA组和miR-210-3p mimic+RAPA组,Western blot和RT-qPCR检测各组MC3T3-E1细胞成骨分化相关指标的变化。结果:(1)与NC mimic组相比,miR-210-3p mimic组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度升高,矿化结节数目增加,细胞自噬水平显著降低(P0.05)。与NC inhibitor组相比,miR-210-3p inhibitor组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞内Runx2疫荧光强度降低,矿化结节数目减少,细胞自噬水平显著升高(P0.05)。(2)与control组相比,3-MA组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著升高(P0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度升高,而RAPA组细胞成骨分化指标的mRNA和蛋白表达水平显著降低(P0.05),细胞内Runx2免疫荧光强度降低。(3)miR-210-3p过表达可逆转RAPA对MC3T3-E1细胞成骨分化的抑制作用(P0.01)。结论:miR-210-3p可通过降低自噬水平促进MC3T3-E1细胞的成骨分化。