TRPM2基因敲除小鼠的建立与鉴定

作     者：王存连 李龙飞 张瑞华 徐明举 徐彤 WANG Cunlian;LI Longfei;ZHANG Ruihua;XU Mingju;XU Tong

作者机构：河北北方学院动物科技学院张家口075000 

出 版 物：《生物学杂志》 (Journal of Biology)

年 卷 期：2023年第40卷第4期

页      面：114-118页

学科分类：0710[理学-生物学] 07[理学] 08[工学] 09[农学] 071007[理学-遗传学] 0901[农学-作物学] 0836[工学-生物工程] 090102[农学-作物遗传育种] 

基　　金：河北省第二期现代农业产业技术体系蛋肉鸡创新团队建设专项经费项目(HBCT2018150207) 河北省自然科学基金资助项目(C2022405008,C2022405010) 

主　　题：CRISPR/Cas9 TRPM2 基因敲除 小鼠 

摘      要：利用CRISPR/Cas9技术构建瞬时受体电位M2(TRPM2)基因敲除的杂合子小鼠模型。参考Ensembl数据库中Trpm2-203的内含子2和内含子24序列选择sgRNA靶点并进行体外合成。通过体外转录方式获得Cas9 mRNA,将其与sgRNA显微注射至C57BL/6J小鼠的受精卵后,移植到假孕母鼠的输卵管内,获得F 0代小鼠。阳性F 0代小鼠分别与野生型C57BL/6J小鼠交配获得F 1代。结果显示,经PCR产物测序共获得3只阳性F 0代小鼠;阳性F 0代小鼠分别与野生型C57BL/6J小鼠交配获得4个品系,共获得27只阳性F 1代小鼠。通过实时荧光定量PCR和Western Blot方法验证,表明研究成功构建TRPM2基因敲除杂合子小鼠(TRPM2^(+/-)),为下一步开展TRPM2基因及其表达产物的生物功能研究提供良好的动物模型。