经外泌体释放的高迁移率族蛋白1在菌群紊乱非酒精性脂肪肝中的表达及Toll样受体4信号的调控作用

作     者：孙焕焕 李培杰 冯云 刘梦莹 师文 马富权 和水祥 

作者机构：西安交通大学医学院第一附属医院消化内科 

出 版 物：《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2023年

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：陕西省重点研发计划(2019SF-171、2018SF-051) 

主　　题：非酒精性脂肪性肝病 脂肪性肝炎 高迁移率族蛋白B1 外泌体 Toll样受体4 

摘      要：目的 探讨脂肪性肝炎中肠源性及肝源性高迁移率族蛋白1(HMGB1)经外泌体的释放情况及其调控途径。方法 制备合并肠道菌群紊乱的脂肪肝小鼠(ASC-/-)模型，随机分组，每组5只。野生型小鼠喂食正常饲料(ND)为正常对照组、喂养高脂饮食(HFD)为高脂饮食组；ASC-/-小鼠喂养ND为菌群紊乱组，喂养HFD为高脂菌群紊乱组。共喂养8周。采用共聚焦显微镜检测肝脏及肠黏膜外泌体标志物与HMGB1共定位情况；采用Western blotting及PCR等方法检测外泌体中HMGB1含量。通过棕榈酸(PA)及脂多糖(LPS)处理AML12细胞24 h构建体外模型，采用Western blotting检测HMGB1/CD63水平，并通过siRNA干预了解经外泌体释放的调控机制。结果 高脂饮食组的外泌体分泌较正常对照组增多[(3.5±0.2)ng/ml vs. (1.1±0.3)ng/ml，P0.05]，高脂菌群紊乱组的外泌体亦高于菌群紊乱组[(3.2±0.2)ng/ml vs. (1.9±0.4)ng/ml，P0.05]。通过免疫荧光检测发现，小鼠高脂饮食组较正常对照组、细胞高脂内毒素组较细胞空白对照组均观察到外泌体标记物(ALP或VPS16)与HMGB1共定位增加的现象。PCR检测发现，肝细胞外泌体中的HMGB1在高脂饮食组较正常对照组升高(41.5±10.2 vs. 1.3±0.3，P0.05)，高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(48.6±7.2 vs. 1.5±0.5，P0.05)；TLR4在高脂饮食组较正常对照组升高(13.8±6.2 vs. 2.8±0.9，P0.05)，高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组升高(22.6±4.1 vs. 2.5±1.5，P0.05)。在肠黏膜细胞中，高脂饮食组较正常对照组(0.6±0.2 vs. 0.4±0.1，P0.05)及高脂菌群紊乱组较菌群紊乱组(0.9±0.2 vs. 0.5±0.1，P0.05)中HMGB1与外泌体标记物(CD63)共显影增加。在体外实验中，细胞内毒素组(5.1±0.8)、细胞高脂内毒素组(5.5±0.7)均较细胞空白对照组外泌体的HMGB1(3.8±0.6)增加，而细胞siRNA干预组(3.7±0.6)与细胞空白对照组无明显差异。结论 在高脂饮食及肠道菌群紊乱环境下，HMGB1在肝细胞及肠细胞中经外泌体释放，并受TLR4调控，可能是促进脂肪性肝炎发展的因素之一。