蛇菰多糖对肺鳞癌细胞增殖和迁移的影响及作用机制

作     者：曹玫 梁亚君 于慧斌 李玲 Cao Mei;Liang Yajun;Yu Huibin;Li Ling

作者机构：十堰市人民医院(湖北医药学院附属人民医院)药学部十堰442000 中山大学附属第三医院呼吸内科广州510630 

出 版 物：《国际呼吸杂志》 (International Journal of Respiration)

年 卷 期：2023年第43卷第7期

页      面：796-802页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81903710) 

主　　题：肺肿瘤 癌,鳞状细胞 蛇菰多糖 RP11-1212A22.4 miR-146a-5p 

摘      要：目的探讨蛇菰多糖对人肺鳞癌NCI-H520细胞增殖和迁移的影响及作用机制。方法本研究为实验研究。运用不同浓度蛇菰多糖(0、25、50、75、100、125 mg/L)处理肺鳞癌NCI-H520细胞26 h,CCK-8法分析不同浓度的蛇菰多糖对NCI-H520细胞活力的影响。取对数生长期的NCI-H520细胞分为对照组和蛇菰多糖组(125 mg/L),克隆形成实验、划痕实验分别比较2组NCI-H520细胞增殖和迁移能力,通过蛋白质印迹法比较2组NCI-H520细胞增殖相关蛋白(CDK4、Cyclin D3、Cyclin D2)和迁移相关蛋白(Fibronectin、α-SMA)表达。定量反转录PCR(qRT-PCR)比较2组RP11-1212A22.4、miR-146a-5p的表达。运用TCGA数据库评估RP11-1212A22.4在肺鳞癌组织中的表达。LncRNASNP软件预测RP11-1212A22.4和miR-146a-5p之间的结合位点。采用Pearson法分析TCGA数据库肺鳞癌组织中miR-146a-5p与RP11-1212A22.4表达的相关性。将NCI-H520细胞分为4组:共转染miR-NC和WT-RP11-1212A22.4组、共转染miR-146a-5p和WT-RP11-1212A22.4组、共转染miR-NC和MUT-RP11-1212A22.4组、共转染miR-146a-5p和MUT-RP11-1212A22.4组。双荧光素酶报告基因实验验证4组RP11-1212A22.4和miR-146a-5p的靶向结合。结果不同浓度的蛇菰多糖对NCI-H520细胞增殖抑制率差异有统计学意义(F=63.41,P0.001)。与0 mg/L剂量相比,蛇菰多糖25、50、75、100、125 mg/L剂量作用下的肺鳞癌NCI-H520细胞增殖抑制率均上升(均P0.01)。与对照组相比,蛇菰多糖组NCI-H520细胞克隆形成能力[(106.80±14.42)个比(39.66±8.69)个;t=3.99,P=0.007]和迁移能力[(43.16%±3.38%)比(12.26%±3.55%);t=6.31,P=0.001]被抑制。与对照组相比,蛇菰多糖组NCI-H520细胞中增殖相关蛋白(CDK4、Cyclin D3、Cyclin D2)和迁移相关蛋白(Fibronectin、α-SMA)表达均下降(均P0.01)。与对照组相比,蛇菰多糖组NCI-H520细胞中RP11-1212A22.4的表达升高[(1.06±0.36)比(7.08±0.29);t=12.96,P0.001]。TCGA数据库分析显示,肺鳞癌组织中RP11-1212A22.4表达低于癌旁组织[(5.61±0.81)比(7.21±0.74);t=23.12,P=0.001]。LncRNASNP预测显示,RP11-1212A22.4基因序列与miR-146a-5p存在特异的结合区域,评分最高为0.99。与共转染miR-NC和WT-RP11-1212A22.4组相比,共转染miR-146a-5p和WT-RP11-1212A22.4组的NCI-H520细胞荧光活性降低[(0.99±0.12)比(0.26±0.06);t=5.56,P=0.001];共转染miR-NC和MUT-RP11-1212A22.4组与共转染miR-146a-5p和MUT-RP11-1212A22.4组荧光活性差异无统计学意义[(0.97±0.05)比(1.00±0.07);t=0.26,P=0.804]。miR-146a-5p与RP11-1212A22.4的表达呈负相关(r=-0.82,P0.01)。与对照组相比,蛇菰多糖组miR-146a-5p的表达降低[(5.42±0.77)比(1.01±0.36);t=5.20,P=0.002]。结论蛇菰多糖具有抑制肺鳞癌NCI-H520细胞增殖和迁移的作用,其分子机制可能与蛇菰多糖调控RP11-1212A22.4/miR-146a-5p通路有关。