重楼皂苷Ⅰ对斑马鱼发育毒性、抗血管新生活性及其机制研究

作     者：王璇 陈林珍 林瑞超 陈美琳 范琦琦 李芝奇 赵崇军 李向日 WANG Xuan;CHEN Lin-zhen;LIN Rui-chao;CHEN Mei-lin;FAN Qi-qi;LI Zhi-qi;ZHAO Chong-jun;LI Xiang-ri

作者机构：北京中医药大学中药品质评价北京市重点实验室/中药炮制研究中心北京102488 

出 版 物：《中草药》 (Chinese Traditional and Herbal Drugs)

年 卷 期：2023年第54卷第14期

页      面：4548-4555页

核心收录：

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(82204753) 国家中药标准化项目(ZYBZH-Y-YN-44) 

主　　题：重楼皂苷Ⅰ 斑马鱼 发育毒性 抗血管新生 血管内皮生长因子A 雷帕霉素靶蛋白 类固醇受体共激活因子 表皮生长因子受体 

摘      要：目的 基于模式生物斑马鱼研究重楼皂苷Ⅰ的发育毒性、抗血管新生活性,并利用网络药理学探究重楼皂苷Ⅰ抗血管新生的作用机制。方法 将受精后6 h(6 h post fertilization,6 hpf)的斑马鱼胚胎暴露于不同浓度的重楼皂苷Ⅰ中96 h,在实验终点确认重楼皂苷Ⅰ对斑马鱼胚胎的致死曲线,计算20%致死浓度(20%lethal concentration,LC20)。在实验终点,以斑马鱼自主抽动次数、96 hpf心率、斑马鱼肝脏面积、静脉窦-动脉球间距、总胆固醇(total cholesterol,T-CHO)、三酰甘油(triglyceride,TG)、低密度脂蛋白胆固醇(low-density lipoprotein cholesterol,LDL-C)含量等指标,结合吖啶橙、油红O染色观察综合评价重楼皂苷Ⅰ的发育毒性及其相关靶器官毒性。安全剂量条件下,以斑马鱼肝脏面积和静脉窦-动脉球间距评价重楼皂苷Ⅰ对相关靶器官的影响,同时以节间血管数评价重楼皂苷Ⅰ对斑马鱼节间血管生长的影响。基于网络药理学预测重楼皂苷Ⅰ抗血管新生的作用机制并通过qRT-PCR技术进行验证。结果 重楼皂苷Ⅰ对斑马鱼胚胎的致死曲线为y=270x-23.62,LC20为0.16μg/mL;在亚致死浓度暴露条件下的实验终点,与对照组比较,0.16μg/mL重楼皂苷Ⅰ能够诱导斑马鱼幼鱼出现卵黄囊吸收延迟,脊柱弯曲,尾巴畸变等明显的毒性特征,且T-CHO、TG、LDL-C含量明显升高(P0.05、0.01);吖啶橙染色及油红O染色表明0.16μg/mL重楼皂苷Ⅰ能引起斑马鱼肝脏细胞凋亡和脂肪变性。在安全剂量条件下,与对照组比较,0.06、0.09μg/mL重楼皂苷Ⅰ对主要脏器没有明显影响,但可以抑制节间血管数(P0.01)。网络药理学预测发现重楼皂苷Ⅰ可通过调节血管内皮生长因子A(vascular endothelial growth factor A,VEGFA)、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,m TOR)、类固醇受体共激活因子(steroid receptor coactivator,SRC)、表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)等关键靶点,调控EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等相关信号通路,进而发挥抗血管新生的作用,qRT-PCR实验结果验证了以上靶点。结论 重楼皂苷Ⅰ过高剂量使用会造成斑马鱼胚胎发育毒性,而在安全剂量条件下,重楼皂苷Ⅰ通过调节EGFR酪氨酸激酶抑制剂耐药性等相关通路发挥明显的抗血管新生活性,为重楼皂苷Ⅰ的临床用药安全及开发利用提供了思路,同时也为毒性中药的“有效性-安全性综合评价提供了参考。