兔轮状病毒VP8*蛋白原核表达、基因序列及蛋白特性分析

作     者：赵巧雅 田野 鞠艳 姜亦飞 黄涛 陈秋生 ZHAO Qiaoya;TIAN Ye;JU Yan;JIANG Yifei;HUANG Tao;CHEN Qiusheng

作者机构：南京农业大学动物医学院江苏南京210095 山东省农业科学院家禽研究所山东济南250023 西南大学动物医学院重庆402460 

出 版 物：《畜牧与兽医》 (Animal Husbandry & Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第55卷第7期

页      面：100-107页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：山东省现代农业产业技术体系资助项目(SDAIT-21-06) 山东省重点研发计划(2022CXGC010606) 

主　　题：兔轮状病毒 VP8* 蛋白特性 原核表达 

摘      要：为深入研究兔轮状病毒VP8*蛋白的结构和功能,本研究利用生物信息学软件DNAStar对兔轮状病毒Z3171株的VP8*基因序列进行核苷酸和氨基酸同源性分析,运用生物信息学方法对该蛋白的理化性质、亲/疏水性、磷酸化及糖基化位点、结构域、中和表位及三维结构等进行了分析。设计合成引物,采用PCR方法扩增VP8*蛋白编码基因,并将目的片段克隆到pET28a(+)原核表达载体,经体外原核表达,采用亲和层析纯化获得VP8*目的蛋白。结果显示:Z3171株的VP8*基因与国内外参考序列对比,核苷酸序列同源性为32.8%~90.3%,氨基酸序列同源性为39.2%~91.9%。生物信息学分析显示该蛋白理化性质稳定,无跨膜结构域,不含有信号肽,主要定位于细胞骨架中。其中1个中和表位区域内有2个氨基酸插入,该区域三维构象亦发生变化。PCR扩增的VP8*基因条带大小为558 bp,经测序与目的基因完全一致;经SDS-PAGE和Western blot鉴定,重组VP8*蛋白以可溶形式表达,血凝性试验结果表明该蛋白无血凝性。本研究为VP8*免疫原性分析及研制兔轮状病毒疫苗提供了参考。