AQP5对胃癌干细胞增殖、迁移、侵袭和干性的影响

作     者：高培垚 汪非凡 田恒金 陈阿敏 王娜 张强 GAO Peiyao;WANG Feifan;TIAN Hengjin;CHEN Amin;WANG Na;ZHANG Qiang

作者机构：蚌埠医学院第一附属医院检验科蚌埠233004 蚌埠医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室 

出 版 物：《山西医科大学学报》 (Journal of Shanxi Medical University)

年 卷 期：2023年第54卷第7期

页      面：894-902页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：安徽省自然科学基金面上项目(1908085MH258) 蚌埠医学院研究生科研创新项目(Byycx22036) 

主　　题：胃癌干细胞 AQP5 增殖 迁移 侵袭 干性 

摘      要：目的探讨水通道蛋白5(aquaporin 5,AQP5)对胃癌干细胞(gastric cancer stem cell,GCSC)生物学行为的影响及机制。方法将胃癌细胞AGS通过无血清悬浮成球培养技术富集胃癌干细胞(AGS-GCSC)。通过流式细胞术检测AGS和无血清培养富集的AGS-GCSC中胃癌干性标志物CD133的阳性率来鉴定所富集的AGS-GCSC是否符合后续实验要求。Western blot和qRT-PCR检测AGS和富集的AGS-GCSC中AQP5及胃癌干性标志物八聚体结合转录因子4(octamer-binding transcription factor 4,OCT4)和CD133的表达。运用慢病毒技术将富集的AGS-GCSC分为两组:sh-NC组(阴性对照组)和sh-AQP5组(AQP5低表达组)。通过CCK-8、平板克隆、Transwell、干细胞成球实验检测sh-NC组和sh-AQP5组增殖、迁移、侵袭和成球能力。通过Western blot技术检测sh-NC组和sh-AQP5组中胃癌干性标志物OCT4、CD133的表达。Western blot检测sh-NC组和sh-AQP5组CAMKK2/AMPK通路相关蛋白(磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK)以及自噬相关蛋白(ATG7、P62、LC3Ⅱ)的表达情况。结果流式细胞术结果显示,与胃癌细胞AGS相比,AGS-GCSC中CD133的阳性率明显增加(P0.05),符合后续实验需求。Western blot和qRT-PCR结果显示,与胃癌细胞AGS相比,无血清培养富集的AGS-GCSC中高表达AQP5和胃癌干性标志物OCT4、CD133(P0.05)。CCK-8、平板克隆、Transwell及成球实验表明,与sh-NC组相比,sh-AQP5组AGS-GCSC增殖、迁移、侵袭和成球能力下降(P0.05)。另外,Western blot实验结果显示,与sh-NC组相比,sh-AQP5组AGS-GCSC中干性标志物OCT4、CD133表达下调(P0.05)。Western blot结果显示,与sh-NC组相比,sh-AQP5组磷酸化CAMKK2、磷酸化AMPK的蛋白水平下调,自噬相关蛋白ATG7、LC3Ⅱ表达降低,P62表达增加(P0.05)。结论AQP5可能通过调控CAMKK2/AMPK通路抑制自噬影响GCSC的生物学功能。