circ_0006577在TGF-β1诱导的HK-2细胞和新生小鼠单侧输尿管梗阻中的表达

作     者：于晓寒 范旭 李雪艳 刘华建 刘舸 刘鑫 杨屹 Yu Xiaohan;Fan Xu;Li Xueyan;Liu Huajian;Liu Ge;Liu Xin;Yang Yi

作者机构：中国医科大学附属盛京医院小儿泌尿外科沈阳110004 

出 版 物：《中华小儿外科杂志》 (Chinese Journal of Pediatric Surgery)

年 卷 期：2023年第44卷第4期

页      面：350-355页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100202[医学-儿科学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81571517) 辽宁省重点研发联合计划(2020JH2/10300145) 

主　　题：输尿管梗阻 干扰小RNA 纤维化 

摘      要：目的:探讨circ_0006577在TGF-β1诱导的HK-2细胞和新生小鼠单侧输尿管梗阻中的表达和影响,并利用生物信息学方法预测其潜在的功能。方法:使用重组蛋白TGF-β1(终质量浓度为10 ng/ml)诱导HK-2细胞作为肾纤维化细胞模型,将细胞分为对照组、TGF-β1诱导48 h、96 h及144 h后的实验组四组,采用qRT-PCR检测各组细胞中circ_0006577的表达水平。使用新生小鼠单侧输尿管梗阻作为先天性肾积水模型,将动物分为SHAM组和UUO组两组,每组各3只,分别于术后第5天和第14天取左侧肾脏。采用qRT-PCR检测小鼠肾脏中circ_0006577的表达水平,蛋白质印迹法检测E-cadherin、α-SMA、BCL-2、BAX的表达,HE染色和MASSON染色分别用于观察组织形态学和纤维化程度。将细胞分为nc+TGF-β1和si+TGF-β1两组,构建circ_0006577的siRNA表达载体,于HK-2细胞贴壁生长达30%时加入,转染48 h后收集细胞。采用qRT-PCR检测转染后细胞中circ_0006577的表达水平,蛋白质印迹法检测E-cadherin、α-SMA、BCL-2、BAX的表达情况,应用CCK-8实验检测细胞增殖率。利用circbank和targetscan8.0数据库预测circ_0006577与RSU-1mRNA可能共同结合的microRNA。符合正态分布的计量资料以±s表示,组间比较采用独立样本t检验。结果:qRT-PCR结果表明circ_0006577分别在TGF-β1诱导48 h、96 h、144 h后的实验组中表达上调(48 h表达量为1.757±0.269,t=-3.12,P=0.035;96 h表达量为2.519±0.381,t=-5.31,P=0.006;144 h表达量为3.121±0.660,t=-4.99,P=0.008)。与同一天数SHAM组相比,新生小鼠UUO组中circ_0006577的表达在第5天和第14天时表达上调(2.805±0.109,t=-24.33,P0.001;4.121±0.104,t=-27.71,P0.001)。蛋白质印迹法结果表明,沉默circ_0006577后,与nc+TGF-β1组相比,si+TGF-β1组中α-SMA(表达量为0.363±0.059)、BAX(表达量为0.394±0.114)的表达减少,而E-cadherin(表达量为3.307±1.045)、BCL-2(表达量为4.051±0.705)的表达水平上调,且差异均具有统计学意义(均P0.05)。通过CCK-8分析测定,沉默circ_0006577在转染48 h后抑制细胞增殖率(相对吸光度值为0.093±0.019比0.179±0.058),差异具有统计学意义(t=2.78,P=0.032)。根据circbank和targetscan8.0数据库预测到circ_0006577与RSU-1mRNA可能共同结合的10个microRNA。结论:circ_0006577参与先天性梗阻性肾病的发生发展,沉默circ_0006577可改善TGF-β1诱导的HK-2细胞纤维化和凋亡,这或可成为治疗先天性梗阻性肾病一种新的思路和方法。