重组酶介导的等温扩增技术联合CRISPR-Cas13a快速检测4种腹泻病原菌

作     者：安柏霖 苏璇 郭悦 王祥喜 葛以跃 朱凤才 崔仑标 AN Bailin;SU Xuan;GUO Yue;WANG Xiangxi;GE Yiyue;ZHU Fengcai;CUI Lunbiao

作者机构：南开大学药学院天津300000 江苏省疾病预防控制中心国家卫生健康委员会肠道病原微生物重点实验室江苏南京210009 天津国际生物医药联合研究院天津300000 南京医科大学江苏南京210029 中国科学院生物物理所北京100101 

出 版 物：《中国食品卫生杂志》 (Chinese Journal of Food Hygiene)

年 卷 期：2023年第35卷第3期

页      面：381-389页

核心收录：

学科分类：1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 100403[医学-营养与食品卫生学] 10[医学] 

主　　题：重组酶介导的等温扩增技术 CRISPR-Cas13a 腹泻病原菌 快速分子检测 

摘      要：目的重组酶介导的等温扩增技术(RAA)联合规律间隔性成簇短回文重复序列相关Cas13a蛋白(CRISPR-Cas13a),建立对沙门菌、志贺菌、霍乱弧菌、肠出血性大肠杆菌O157:H74种腹泻病原菌的快速分子检测方法,即RAA-Cas13a。方法设计4种腹泻病原菌的RAA特异性引物和CRISPR RNA(crRNA),利用RAA技术扩增样本核酸,并进行CRISPR-Cas13a恒温荧光检测,以实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)为对照方法,评价RAA-Cas13a优化方法的灵敏度与特异性。结果RAA-Cas13a方法可在35 min内完成检测。检测志贺菌、霍乱弧菌、肠出血性大肠杆菌O157:H7的最低检测限为10 copies/μL,沙门菌最低检测限为1 copy/μL;特异性实验表明每一种病原菌与其余10种对照细菌均无交叉反应。应用建立的方法检测200份实际样本和40份人工污染样本,结果表明同RT-qPCR检测结果一致性高(分别为Kappa=0.927和Kappa=1.000)。结论RAA-Cas13a检测方法具有灵敏度高,特异性强等优点,能用于4种腹泻病原菌的快速检测。