细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-73对肝纤维化的治疗作用及相关机制研究

作     者：王浩 莫缓椰 孙联康 涂康生 刘青光 Wang Hao;Mo Huanye;Sun Liankang;Tu Kangsheng;Liu Qingguang

作者机构：西安交通大学第一附属医院肝胆外科西安710061 

出 版 物：《中华肝胆外科杂志》 (Chinese Journal of Hepatobiliary Surgery)

年 卷 期：2023年第29卷第4期

页      面：278-284页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82202903) 

主　　题：肝纤维化 周期素依赖激酶抑制蛋白质类 肝星状细胞 TGF-β信号通路 

摘      要：目的探讨Rab11抑制剂细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂-73(CDKI-73)在肝纤维化中的治疗作用及潜在分子机制。方法将人LX2细胞分成4组:阴性对照组、转化生长因子-β(TGF-β)组、CDKI-73组和TGF-β+CDKI-73组。取15只5周龄雌性C57小鼠,体重(18.04±0.62)g,分成3组,每组5只:对照组(腹腔注射橄榄油+CDKI-73空载体灌胃)、四氯化碳(CCl4)组(腹腔注射CCl4+CDKI-73空载体灌胃)和CCl4+CDKI-73组(腹腔注射CCl4+CDKI-73灌胃)。另取15只5周龄雌性C57小鼠,体重(18.06±0.34)g,分成3组,每组5只:假手术(Sham)组、胆管结扎组(打开腹腔寻找到胆总管并结扎+ CDKI-73空载体灌胃)和胆管结扎+CDKI-73组(打开腹腔寻找到胆总管结扎+CDKI-73灌胃)。蛋白质印迹法检测CDKI-73对LX2细胞以及小鼠肝脏中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)或纤维粘连蛋白(FN)的表达差异;Masson及天狼星红检测CDKI-73处理组及对照组小鼠肝纤维化的不同程度;免疫组化检测不同处理组小鼠肝脏α-SMA的表达差异。结果 CCl4组小鼠天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于对照组均增加(q=38.47、24.99、36.79),而CCl4+CDKI-73组天狼星红、Masson染色的胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于CCl4组的各指标均下降(q=24.72、14.87、27.50),差异均具有统计学意义(均P0.001)。胆管结扎组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于Sham组均增加(q=28.23、41.01、44.16),而胆管结扎+CDKI-73组天狼星红、Masson染色胶原生成和免疫组化α-SMA表达相较于胆管结扎组的各指标均下降(q=22.88、34.31和33.97),差异有统计学意义(均P0.001)。TGF-β组α-SMA和FN蛋白相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组(α-SMA:3.71±0.34比1.28±0.31;FN:3.21±0.39比0.83±0.06),差异具有统计学意义(均P0.001)。TGF-β组α-SMA和FN mRNA相对表达量均高于TGF-β+CDKI-73组的各对应值,差异均具有统计学意义(均P0.001)。CDKI-73组TGF-β受体Ⅱ蛋白相对表达量高于阴性对照组(4.68±0.63比1.00±0.22),差异有统计学意义(P=0.004)。TGF-β+CDKI-73组磷酸化SMAD2的相对表达量低于TGF-β组(1.67±0.24比3.99±0.44),差异有统计学意义(P0.001)。Transwell实验结果表明,0.5 μmol/L CDKI-73即可抑制LX2细胞的迁移能力,且随着CDKI-73浓度的增加,抑制能力也越强。结论 CDKI-73在体内和体外均可通过抑制依赖Rab11的TGF-β信号通路,从而抑制肝星状细胞的活化以及肝纤维化的形成。