Pyk2在糖尿病小鼠的表达和肾小管上皮细胞的作用及ALM调控Pyk2延缓肾纤维化的研究

作     者：蔡雪妮 杨雨星 张芮 曾永秦 文青 李智恒 周兴艳 严瑞 CAI Xueni;YANG Yuxing;ZHANG Rui;ZENG Yongqin;WEN Qing;LI Zhi‐heng;ZHOU Xingyan;YAN Rui

作者机构：贵州医科大学附属医院肾内科贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院内分泌与代谢病科贵州贵阳550004 

出 版 物：《中国病理生理杂志》 (Chinese Journal of Pathophysiology)

年 卷 期：2023年第39卷第4期

页      面：623-631页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金资助项目(No.81960140) 贵州省科学技术基金资助项目(黔科合基础-ZK〔2021〕一般379号) 贵州省卫健委科技基金资助项目(No.gzwjkj2020-1-002) 贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究资助项目(No.QZYY‐2021-020)。 

主　　题：富含脯氨酸的酪氨酸激酶2 α-硫辛酰胺 糖尿病肾病 肾纤维化 

摘      要：目的:探讨富含脯氨酸的酪氨酸激酶2(proline-rich tyrosine kinase 2,Pyk2)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)小鼠中的表达和在肾小管上皮细胞的作用,以及α-硫辛酰胺(alpha-lipoamide,ALM)是否通过调控Pyk2延缓糖尿病肾病(diabetic kidney disease,DKD)肾纤维化。方法:选取8周龄野生型(wild-type,WT)小鼠和db/db小鼠各5只,正常饮食饲养至16周,Western blot检测肾组织纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、III型胶原α1链(collagen type III alpha 1 chain,COL3A1)、Pyk2和p-Pyk2(Y402)的蛋白水平,免疫组织化学染色观察Pyk2和p-Pyk2(Y402)蛋白分布及表达情况,RT-qPCR检测Pyk2的mRNA水平。体外培养大鼠肾小管上皮细胞系NRK-52E,取对数生长期细胞予以高糖高脂(high glucose and high palmitic acid,HP)、Pyk2抑制剂PF-562271、ALM处理及转染Pyk2过表达质粒后,分为正常糖(normal glucose,NG)组、HP组、HP+PF-562271组、HP+vector组、HP+OE-Pyk2组、HP+ALM组和HP+ALM+OE-Pyk2组,每组重复3次。免疫荧光染色观察Pyk2蛋白定位及表达,Western blot检测FN、COL3A1、Pyk2和p-Pyk2(Y402)的蛋白水平,RT-qPCR检测Pyk2的mRNA水平。结果:与WT组相比,db/db组小鼠纤维化指标(FN和COL3A1)蛋白表达升高,Pyk2和p-Pyk2(Y402)主要在肾小管中表达且蛋白表达水平显著升高,Pyk2的mRNA水平显著升高(P0.05)。与NG组比较,HP组中纤维化指标、Pyk2和p-Pyk2(Y402)蛋白水平显著升高,Pyk2的mRNA水平显著升高(P0.05);予PF-562271处理后,与HP组比较,p-Pyk2(Y402)和纤维化指标蛋白水平显著降低,予转染Pyk2过表达质粒后,与HP+vector组比较,纤维化指标蛋白水平显著升高(P0.05)。经ALM干预后,与HP组比较,Pyk2、p-Pyk2(Y402)及纤维化指标蛋白水平显著降低(P0.05),与HP+ALM组比较,转染Pyk2过表达质粒后,纤维化指标的变化趋势被逆转(P0.05)。结论:Pyk2在DM小鼠中表达升高,在肾小管上皮细胞表达可促进DKD肾纤维化进展;ALM可通过下调肾小管上皮细胞中Pyk2的表达及磷酸化延缓DKD肾纤维化进展。