基于PI3K/Akt信号通路探讨祛风骨痛巴布膏对寒湿痹阻型骨关节炎模型大鼠的干预作用

作     者：陶雪莹 王超 黄凤玉 张昕卓 刘春芳 苏晓慧 林娜 TAO Xueying;WANG Chao;HUANG Fengyu;ZHANG Xinzhuo;LIU Chunfang;SU Xiaohui;LIN Na

作者机构：贵州中医药大学贵阳550025 中国中医科学院中药研究所北京100700 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2023年第29卷第9期

页      面：156-165页

核心收录：

学科分类：100504[医学-方剂学] 1005[医学-中医学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 

基　　金：中国中医科学院科技创新工程项目(C12021A03808) 国家“重大新药创制”科技重大专项(2019ZX09731-002) 中国中医科学院中药研究所技术研发项目(20211024)。 

主　　题：祛风骨痛巴布膏 骨关节炎(OA) 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路 炎症因子 寒湿痹阻 

摘      要：目的:探讨祛风骨痛巴布膏对寒湿痹阻型骨关节炎(OA)大鼠的干预作用,并初步阐明其作用机制。方法:将SD雄性大鼠分成6组,为正常组、模型组、活血止痛膏组(1.26 cm^(2)·d^(-1))、祛风骨痛巴布膏低、中、高剂量组(75、150、300 mg·d^(-1))。通过关节腔注射木瓜蛋白酶联合L-半胱氨酸制备OA模型,造模第2天开始施加气候因素,建立寒湿痹阻型OA大鼠病证结合动物模型。标准VonFrey纤维评价机械痛阈值;双后肢负重差评分及关节功能评分;苏木素-伊红(HE)染色和番红固绿染色观察大鼠膝关节组织病理变化和软骨退变;免疫组化法(IHC)检测白细胞介素(IL)-1β、白细胞介素(IL)-8、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)和组织蛋白酶K(CTSK)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)、T细胞的核因子1(NFATc1)、MMP-9和CTSK的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组在造模后出现了显著的机械痛敏反应(P0.01),双后肢负重差和关节功能评分明显升高(P0.05,P0.01)。与模型组比较,祛风骨痛巴布膏高剂量组和活血止痛膏组均可明显降低大鼠机械痛敏反应、负重差和关节功能评分(P0.05,P0.01),且祛风骨痛巴布膏中剂量也可一定程度改善关节功能,大鼠膝关节软骨退变明显减轻(P0.05,P0.01);祛风骨痛巴布膏、活血止痛膏均在一定程度上抑制OA大鼠关节软骨中IL-1β、IL-8、TNF-α、MMP-9、CTAK、PI3K、p-Akt、Akt等相关蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:祛风骨痛巴布膏通过抑制寒湿痹阻型OA模型大鼠关节软骨中PI3K/Akt信号通路进而抑制炎性因子和基质金属蛋白酶的释放,最终减弱局部软骨退变,改善关节功能。