构建载免疫调节肽/miR-26a复合物微球缓释体系的体内成骨

作     者：李欣伦 朱昱树 杨乙苓 何思齐 文楠 牟雁东 Li Xinlun;Zhu Yushu;Yang Yiling;He Siqi;Wen Nan;Mu Yandong

作者机构：西南医科大学口腔医学院四川省泸州市646000 川北医学院四川省南充市637000 四川省医学科学院·四川省人民医院四川省成都市610072 

出 版 物：《中国组织工程研究》 (Chinese Journal of Tissue Engineering Research)

年 卷 期：2023年第27卷第34期

页      面：5469-5476页

学科分类：0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 1003[医学-口腔医学] 1002[医学-临床医学] 08[工学] 1010[医学-医学技术（可授医学、理学学位）] 100302[医学-口腔临床医学] 100215[医学-康复医学与理疗学] 0836[工学-生物工程] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(82071168),项目负责人:牟雁东 四川省科技厅重点研发项目(2021YFS0009),项目负责人:牟雁东 

主　　题：聚乳酸-羟基乙酸共聚物 缓释微球 免疫调节肽 miR-26 颅骨缺损 骨再生修复 

摘      要：背景:课题组前期研究证明,免疫调节肽DP7-C具有良好的免疫调节功能,并可高效转染递送miRNA进入细胞发挥调控功能。目的:制备并筛选不同尺寸的多孔聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球,装载免疫调节肽DP7-C/miR-26a复合物,构建并优化缓释体系,验证其生物相容性及体内成骨能力。方法:(1)微球制备:以碳酸氢铵作为造孔剂,通过双乳化法制备多孔聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球,通过调整转速制备3种不同尺寸的多孔微球,将微球分散于免疫调节肽DP7-C/miR-26a复合物溶液中,制备载药微球,通过微球物理性能表征、投入产出比、包封率及缓释性能,筛选出最佳载药多孔聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球,用于后续实验。(2)体外细胞实验:将不同质量浓度的载药与未载药微球溶液分别与大鼠骨髓间充质干细胞共培养,采用CCK-8法检测微球的生物相容性。(3)动物体内实验:取9只成年SD大鼠,按照随机数字表法分为空白组、对照组、实验组,每组3只。3组均建立直径5 mm颅骨缺损模型,空白组不进行干预,对照组植入未载药微球,实验组植入载药微球,术后8周,分别进行主要脏器及颅骨缺损区病理形态、碱性磷酸酶免疫组化染色检测。结果与结论:(1)微球制备:通过相关检测结果得出,相较于转速500,1200 r/min,转速1000 r/min制备的载药微球具有均匀的尺寸、更高的产率及良好的缓释性能,可用于后续实验。(2)体外细胞实验:CCK-8检测结果显示,载药与未载药微球溶液对骨髓间充质干细胞的增殖无影响,无明显的细胞毒性。(3)动物体内实验:苏木精-伊红染色显示,各组大鼠内脏未发生与实验干预相关的病理学改变。苏木精-伊红及Masson染色显示,空白组缺损部位主要被纤维结缔组织增生占据,可见少量血管生成,未见明显新骨生成;对照组缺损部位可见少量新骨生成及不同程度纤维组织增生,可见新生毛细血管;实验组缺损区域有明显新骨生成及不同程度纤维组织增生,可见新生毛细血管。免疫组化染色显示,实验组缺损部位碱性磷酸酶表达高于对照组、空白组(P0.05)。(4)结果显示,多孔聚乳酸-羟基乙酸共聚物微球/免疫调节肽miR-26a复合物缓释体系具有良好的生物相容性及体内成骨性能,可促进大鼠颅骨临界骨缺损的再生修复。