乳铁蛋白通过调节Keap1-Nrf2信号通路改善Aβ25-35诱导的N2a细胞氧化应激和凋亡

作     者：汪晓语 吕嘉琦 赵儒花 单树方 成果 张伶俐 张林 WANG Xiao-yu;LV Jia-qi;ZHAO Ru-hua;SHAN Shu-fang;CHENG Guo;ZHANG Ling-li;ZHANG Lin

作者机构：四川大学华西第二医院西部妇幼医学研究院出生缺陷与相关妇儿疾病教育部重点实验室 四川大学华西第二医院药学部循证药学中心 

出 版 物：《现代预防医学》 (Modern Preventive Medicine)

年 卷 期：2023年第50卷第6期

页      面：1098-1104页

学科分类：1002[医学-临床医学] 100203[医学-老年医学] 10[医学] 

基　　金：国家重点研发计划(2020YFC2006300) 国家自然科学基金面上项目(82173512) 四川省科技厅应用基础项目(2021YJ0156) 

主　　题：阿尔茨海默病 氧化应激 乳铁蛋白 β淀粉样蛋白 

摘      要：目的 探索外源性乳铁蛋白(lactoferrin, Lf)对淀粉样蛋白25-35(β amyloid 25-35,Aβ25-35)诱导的阿尔茨海默病(Alzheimer’s Disease, AD)细胞模型的相关作用及机制。方法 将N2a细胞随机分为空白对照组，Lf组，Aβ组和Aβ+Lf组，应用CCK-8法检测细胞活力；Western Blot检测细胞Tau、p-Tau、Bax、Bcl-2、Caspase3、Cleaved-Caspase3、Nrf2、Keap1、HO-1等蛋白表达水平；Annexin FITC/PI双染法检测细胞凋亡比率；试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase, GSH-Px)和过氧化氢酶(catalase, CAT)活性以及氧化产物活性氧(reactive oxygen species, ROS)荧光强度、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)释放量、丙二醛(malondialdehyde, MDA)含量。采用t检验和方差分析进行组间比较。结果 (1)当Aβ25-35干预浓度为20μmol/L,干预时间为24 h时，细胞活力降至80%,且Tau蛋白磷酸化水平较空白组显著增加，表明AD细胞模型构建成功；(2)与Aβ组相比，Aβ+Lf组Bcl-2表达量显著增加(t=-10.573,P0.001),Bax(t=40.529,P0.001)和Cleaved-Caspase3/Caspase3(t=15.376,P0.001)表达量显著降低，差异有统计学意义；(3)与Aβ组相比，Aβ+Lf组ROS荧光强度显著减弱，MDA含量(t=10.175,P0.001)和LDH释放量(t=7.453,P0.001)显著降低；(4)与Aβ组相比，预先干预Lf后，Keap1表达量显著降低(t=15.766,P0.001),Nrf2(t=-32.475,P0.001)和HO-1表达量(t=-6.792,P0.001)显著升高。结论 Lf可通过调节Keap1-Nrf2/HO-1信号通路改善Aβ25-35诱导的N2a细胞氧化应激和凋亡。