栝楼ISSR－PCR反应体系的建立和优化

作     者：曲超 孙群 丁自勉 王建华 孙宝启 Qu Chao;Sun Qun;Ding Zimian;Wang Jianhua;Sun Baoqi

作者机构：中国农业大学农学与生物技术学院农业部基因组学与遗传改良重点实验室北京市作物遗传改良重点实验室北京100193 中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所北京100193 

出 版 物：《基因组学与应用生物学》 (Genomics and Applied Biology)

年 卷 期：2009年第28卷第1期

页      面：127-131页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：国家科技攻关课题(2001BA701A59) 国家科技支撑计划(2006BA106A15)资助 

主　　题：栝楼 ISSR-PCR 正交设计 体系优化 

摘      要：用改良SDS法提取栝楼(Trichosanthes kirilowii Maxim)叶片DNA为模板,通过单因素试验研究模板、引物、Taq DNA聚合酶和dNTPs等4因素各7个水平对栝楼ISSR-PCR扩增结果的影响,并通过正交试验对各因子的浓度进行优化,首次建立了栝楼ISSR-PCR分析的最适反应体系:20μL的反应体系中,1×buffer,模板含量为50ng,引物的浓度为0.5μmol/L,Taq DNA聚合酶的用量为0.8U,dNTPs的浓度为200μmol/L。随机选取10条引物验证体系稳定性,并对190条ISSR引物初筛,得到条带清晰、多态性好的引物126条。经验证,本实验所建立的栝楼ISSR-PCR反应体系具有稳定可靠、可重复性好、多态性较强等特点,能够较好的应用于栝楼的ISSR分子生物学分析。