耐盐氨基甲酸乙酯水解酶的分离纯化及酶学性质

作     者：卜攀攀 陈坚 堵国成 

作者机构：江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室江苏无锡214122 

出 版 物：《生物工程学报》 (Chinese Journal of Biotechnology)

年 卷 期：2014年第30卷第3期

页      面：404-411页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 0831[工学-生物医学工程（可授工学、理学、医学学位）] 081702[工学-化学工艺] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 08[工学] 0817[工学-化学工程与技术] 0836[工学-生物工程] 

基　　金：国家重点基础研究发展计划(973计划)(Nos.2012CB720802 2012CB720806)资助~~ 

主　　题：氨基甲酸乙酯 氨基甲酸乙酯水解酶 耐盐 分离纯化 酶学性质 

摘      要：氨基甲酸乙酯是发酵食品中存在的一种致癌物质,酶法去除发酵食品中的氨基甲酸乙酯是消除氨基甲酸乙酯危害的一种重要方法。从小鼠的胃部获得了一株产氨基甲酸乙酯水解酶的肺炎克雷伯氏菌,为了解该氨基甲酸乙酯水解酶的酶学性质,从肺炎克雷伯氏菌中提取获得氨基甲酸乙酯水解酶粗酶液,经硫酸铵沉淀、离子交换层析和凝胶过滤层析分离得到氨基甲酸乙酯水解酶纯酶。通过十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺电泳(SDS-PAGE)分析,估计该酶的分子量约为55 kDa。其水解氨基甲酸乙酯的Km值为74 mmol/L。酶反应的最适温度为55℃,最适pH为7.0。乙二胺四乙酸(EDTA)和二硫苏糖醇(DTT)对该酶有较强的激活作用,而Cu2+和Zn2+则有较强的抑制作用。该酶可耐受高浓度NaCl,对低浓度乙醇也有一定的耐受性,对于酱油中氨基甲酸乙酯的消除有一定的参考意义。