副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5的B细胞抗原表位鉴定

作     者：李淼 李春玲 岳磊 宋帅 杨冬霞 

作者机构：广东省农业科学院兽医研究所广东广州510640 广东省兽医公共卫生公共实验室广东广州510640 

出 版 物：《中国兽医学报》 (Chinese Journal of Veterinary Science)

年 卷 期：2014年第34卷第1期

页      面：50-55页

核心收录：

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：广东省农业科技重大专项资助项目(2011A020101008) 广州市农业科技重大专项资助项目(2009A1-E041) 

主　　题：副猪嗜血杆菌 外膜蛋白P5 抗原表位 

摘      要：副猪嗜血杆菌外膜蛋白P5能诱导机体产生免疫保护反应，同时可以用于特异性的血清学诊断，本试验选取P5蛋白进行抗原表位鉴定。首先通过PCR扩增P5F1（1～204aa），P5F2（170～296aa）及P5F3（280～371aa）3个片段，PCR产物分别定向克隆到表达载体pET32a（＋）中表达纯化。根据ELISA和Western blotting结果确定P5F3片段（280—371aa）是OmpP5的免疫优势决定区。为了进-步对该免疫优势决定区进行抗原表住鉴定，设计了-套11个部分重叠的短肽，这些短肽覆盖全部280～371aa片段。每-个短肽合成1对寡核苷酸链，退火后插入表达载体pGEX-6p-1，与GST进行融合表达。用HPS阳性血清进行ELISA和Western blotting扫描，鉴定出其表位位于。TGNTCDAVKGRKALIT351。通过序列分析证实该抗原表位在不同的HPS菌株中高度保守。本试验确定了位于HPSOmpP5上的-个抗原表位，为建立-种方便、快捷、适用于现地大规模样品检测的鉴别诊断方法奠定了基础，同时也为HPS新型亚单位疫苗的研制，以及研究病原茵感染和机体免疫过程中P5蛋白与宿主体内相应分子之间的相互作用提供了有用信息。