Bt毒素诱导下小菜蛾实时定量PCR内参基因的筛选

作     者：符伟 谢文 张卓 吴青君 王少丽 张友军 

作者机构：湖南农业大学农药研究所长沙410128 湖南省植物保护研究所长沙410125 中国农业科学院蔬菜与花卉研究所北京100081 

出 版 物：《昆虫学报》 (Acta Entomologica Sinica)

年 卷 期：2012年第55卷第12期

页      面：1406-1412页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金："十二五"科技支撑计划课题(2012BAD19B06) 农业部公益性行业专项(201103021) 蔬菜有害生物控制与优质栽培北京市重点实验室项目 园艺作物病虫害治理湖南省重点实验室项目 

主　　题：小菜蛾 实时定量PCR 内参基因 抗药性 Bt毒素 

摘      要：【目的】筛选出Bt毒素诱导后的小菜蛾Plutella xylostella(L.)的实时定量PCR最适内参基因。【方法】选取核糖体18S rRNA(18S rRNA)、肌动蛋白(ACTB)、延伸因子(EF1)、3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)、核糖体蛋白L32(RPL32)、核糖体蛋白S13(RPS13)、核糖体蛋白S20(RPS20)和β-微管蛋白(TUB)基因作为候选内参基因,以geNorm、Normfinder和BestKeeper软件分析这8个基因在Bt毒素诱导后的小菜蛾不同品系中肠组织中的表达稳定性。并应用筛选出来的内参基因分析小菜蛾氨肽酶2(aminopeptidase N2,APN2)基因的表达水平。【结果】geNorm软件以RPS13和EF1为最稳定内参基因,NormFinder和BestKeeper软件均以RPS13和RPL32为最稳定基因。使用3种不同内参基因分析Bt毒素诱导后的小菜蛾Bt抗性和敏感品系中ANP2表达水平时,新的内参基因EF1和传统内参基因RPL32表现了良好的稳定性,二者作为标准化因子,ANP2表达量结果基本一致,而使用18S rRNA作为内参基因,却导致部分表达量分析结果有所误差。【结论】筛选出PRS13,RPL32和EF1可以作为小菜蛾某些试验条件下的内参基因,对小菜蛾基因表达研究奠定了一定基础,也对其他昆虫内参基因的筛选具有参考价值。