hsa_circ_0000670通过miR-515-5p/SIX1分子轴促进胃癌进展

作     者：顾宏 阮汝娟 卢小冬 褚雪峰 Gu Hong;Ruan Rujuan;Lu Xiaodong;Chu Xuefeng

作者机构：南通大学附属如皋医院普外科江苏省如皋市226500 南通大学附属如皋医院心胸外科江苏省如皋市226500 

出 版 物：《中华肿瘤杂志》 (Chinese Journal of Oncology)

年 卷 期：2023年第45卷第3期

页      面：238-252页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

主　　题：胃肿瘤 circ_0000670 miR-515-5p SIX1 

摘      要：目的探讨hsa_circ_0000670通过调控miR-515-5p/SIX1分子轴促进胃癌进展的分子机制。方法收集2014—2015年南通大学附属如皋医院收治的35例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织,采用实时荧光定量聚合酶链反应法和Western blot法分别检测胃癌组织、癌旁正常组织、人胃上皮细胞GES-1、胃癌细胞AGS、HGC-27中circ_0000670、miR-515-5p、SIX1的表达水平;采用Pearson相关分析分析circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1、circ_0000670与SIX1的相关性。采用Kaplan-Meier法和Log rank检验分析circ_0000670低表达组(17例)和circ_0000670高表达组(18例)患者的生存情况。采用平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率,采用划痕实验、Transwell实验检测细胞迁移及侵袭能力,双荧光素酶报告实验检测circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1的靶向关系。分别将sh-NC、sh-circ_0000670转染至HGC-27细胞,将细胞注射入裸鼠体内,检测移植瘤体积及重量,并检测移植瘤组织中circ_0000670、miR-515-5p及SIX1蛋白的表达水平,Western blot法检测E-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果胃癌组织及细胞系中circ_0000670、SIX1的表达水平高于癌旁正常组织及胃上皮细胞GES-1,miR-515-5p的表达水平低于癌旁正常组织及胃上皮细胞GES-1(均P0.05)。circ_0000670低表达组患者5年生存率(82.4%)高于circ_0000670高表达组(28.7%,P=0.034)。circ_0000670与miR-515-5p、miR-515-5p与SIX1呈负相关(r分别为-0.846、-0.615,均P0.001),circ_0000670与SIX1呈正相关(r=0.814,P0.001)。转染si-circ_0000670或转染miR-515-5p mimic可减弱胃癌细胞AGS、HGC-27增殖、迁移及侵袭能力(均P0.05),阻滞细胞于G_(0)/G_(1)期,增加细胞凋亡能力,提高E-cadherin蛋白表达水平,降低S期细胞比例及Vimentin蛋白表达水平(均P0.05)。双荧光素酶报告实验证实,circ_0000670可靶向调控miR-515-5p,miR-515-5p可靶向调控SIX1。共转染si-circ_0000670与miR-515-5p inhibitor可逆转转染si-circ_0000670对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的作用(均P0.05);共转染miR-515-5p mimic与pcDNA-SIX1可逆转转染miR-515-5p mimic对细胞增殖、迁移、侵袭、细胞周期及凋亡的作用(均P0.05)。sh-circ_0000670组小鼠移植瘤体积及重量[分别为(299.20±47.58)mm^(3)和(289.80±48.73)g]低于sh-NC组[分别为(596.20±125.46)mm^(3)和(538.00±114.39)g,均P0.05],sh-circ_0000670组小鼠移植瘤组织中circ_0000670和SIX1表达水平降低,miR-515-5p的表达水平升高(均P0.05)。结论敲降circ_0000670的表达可通过调控miR-515-5p/SIX1分子轴从而减弱胃癌细胞增殖、迁移及侵袭能力,诱导细胞周期阻滞于G_(0)/G_(1)期及促进细胞凋亡。