血管内皮细胞Ddx24基因条件性敲除鼠构建以及对视网膜血管新生的影响

作     者：李冰 甘海润 蔡建勋 龙浩宇 李露婷 Bing Li;Hairun Gan;Jianxun Cai;Haoyu Long;Luting Li

作者机构：中山大学附属第五医院眼科广东珠海519000 中山大学附属第五医院介入医学中心广东珠海519000 中山大学附属第五医院广东省生物医学影像重点实验室广东珠海519000 中山大学附属第五医院广东省分子影像技术工程研究中心广东珠海519000 

出 版 物：《中华介入放射学电子杂志》 (Chinese Journal of Interventional Radiology：electronic edition)

年 卷 期：2022年第10卷第4期

页      面：429-435页

学科分类：1008[医学-中药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(82072033) 广东省自然科学基金(2021A1515010380) 中山大学临床医学研究5010计划项目(2018011) 

主　　题：Ddx24 Cre-LoxP 视网膜血管新生 内脏血管畸形 

摘      要：目的构建血管内皮细胞Ddx24基因条件性敲除小鼠(Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)),并利用该模型探索Ddx24基因对小鼠胚胎发育和视网膜血管新生的影响,为进一步探讨DDX24基因在内脏血管畸形中发挥的功能作用和具体分子机制提供动物模型。方法运用Cre-LoxP系统构建Ddx24基因的Flox修饰小鼠,并与血管内皮细胞特异性表达Cre酶的Cdh5-Cre小鼠进行繁育,以建立Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠模型。利用PCR和琼脂糖凝胶电泳进行基因鉴定,然后利用Western blot或qPCR实验验证Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠血管组织中DDX24蛋白和mRNA的表达改变,最后通过H&E染色和免疫荧光实验观察Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠胚胎和视网膜血管发育的变化。结果成功构建Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠,并通过Western Blot和qPCR检测发现Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠血管组织中DDX24表达显著下降;在血管内皮细胞中敲除Ddx24基因后无胚胎致死性,可导致幼鼠视网膜血管新生异常增多。结论利用Cre-LoxP系统获得Cdh5-Cre×Ddx24^(flox/flox)小鼠,发现血管内皮细胞条件性敲除Ddx24基因可使幼鼠视网膜血管新生异常增多,为研究DDX24在内脏血管畸形中的作用提供了有效动物模型。