防气溶胶污染的UDG-LAMP-LFD核酸检测体系的建立

作     者：陈星湘 费樱 黄月明 汪浪 王榕 吴青青 CHEN Xing-xiang;FEI Ying;HUANG Yue-ming;WANG Lang;WANG Rong;WU Qing-qing

作者机构：贵州医科大学医学检验学院临床微生物与免疫学教研室贵州贵阳550004 贵州医科大学附属医院临床检验中心 贵州省人民医院 湖南医药学院 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2023年第18卷第2期

页      面：147-152页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：贵州省科技厅项目(No.黔科合基础-Z一般441) 贵州医科大学2021年博士科研启动基金项目(No.gyfybsky-2021-47) 贵州医科大学国家自然科学基金培育项目(No.19NSP081)。 

主　　题：热敏UDG酶 环介导等温扩增技术 横向流动试纸条 人乳头瘤病毒18型 气溶胶污染 

摘      要：目的 建立一种基于热敏UDG酶防污染的、环介导等温扩增(LAMP)技术及横向流动试纸条(LFD)联合使用的核酸检测方法,实现对HPV18的快速、可视化检测。方法 使用LAMP在线引物设计软件设计HPV18特异性引物,同时引入热敏UDG酶,建立UDG-LAMP检测体系,优化T/U碱基比例,设置对照试验验证热敏UDG酶防污染能力;根据LFD要求,设计特异性同化探针及淬灭探针,建立UDG-LAMP-LFD核酸检测体系并对LAMP反应时间进行优化;对该体系进行灵敏度、特异性及临床样品的验证,并与QPCR结果进行比较。结果 优化的LAMP反应时间为40 min, T/U比例为1∶1;热敏UDG酶孵育时间为10 min,防污染效果显著;LFD结果判读耗时5 min,整个检测时间为55 min。该UDG-LAMP-LFD核酸检测体系在以HPV18作为检测对象时,灵敏度10^(3)拷贝/μl;29例临床样品的验证结果与QPCR检测结果完全一致。结论 建立的UDG-LAMP-LFD检测体系可快速、特异、灵敏、可视化的检测HPV18,同时可避免气溶胶污染导致的假阳性。该方法对实验设备及工作人员要求较低,适合在偏远地区及基层医院使用。