人源H3N2亚型猪流感病毒反向遗传操作技术平台的建立

作     者：姚云 张毅峰 王帅勇 虞凌雪 朱世强 王娟 单同领 周艳君 童武 郑浩 李国新 童光志 于海 YAO Yun;ZHANG Yifeng;WANG Shuaiyong;YU Lingxue;ZHU Shiqiang;WANG Juan;SHAN Tongling;ZHOU Yanjun;TONG Wu;ZHENG Hao;LI Guoxin;TONG Guangzhi;YU Hai

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心扬州225009 

出 版 物：《中国动物传染病学报》 (Chinese Journal of Animal Infectious Diseases)

年 卷 期：2022年第30卷第6期

页      面：13-18页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：国家自然科学基金面上项目(31970175) 中央级公益性科研院所基本科研业务费项目(2019JB05) 中国农业科学院创新工程“猪病毒性繁殖障碍综合症团队”项目 

主　　题：RT-PCR 猪流感 H3N2亚型 反向遗传操作技术 

摘      要：为了构建人源H3N2亚型猪流感病毒的反向遗传操作技术平台,利用RT-PCR扩增出流感病毒的8个基因片段,酶切后连接到双向转录表达载体p BD上,将8个重组质粒纯化后转染至293T细胞于54 h后收取上清液并接种MDCK细胞直至出现细胞病变,取上清液检测出有血凝活性。全基因序列测定结果表明,拯救毒株与野生毒株核苷酸序列比对结果一致,病毒拯救成功。人源H3N2亚型猪流感病毒的成功拯救为猪流感病毒的生物学特性、分子致病机制及疫苗研发奠定了基础。