猪圆环病毒2型山西流行株Cap蛋白可溶性表达与免疫原性分析

作     者：薛翼鹏 赵岳 程景 孟帆 樊振华 米瑞娟 吴忻 XUE Yi-peng;ZHAO Yue;CHENG Jing;MENG Fan;FAN Zhen-hua;MI Rui-juan;WU Xin

作者机构：山西农业大学动物医学学院山西太原030032 

出 版 物：《中国兽医杂志》 (Chinese Journal of Veterinary Medicine)

年 卷 期：2023年第59卷第1期

页      面：28-35页

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：山西省农业科学院应用基础研究计划优秀青年基金项目(YCX2020YQ16) 中央引导地方科技发展资金项目(YDZJSX2022C023) 山西省重点研发计划项目(201903D221005) 山西省农业科学院农业科技创新研究专项基金项目(YCX2020107) 山西农业大学动物医学学院科研创新团队计划(DY-CX004) 山西省重点研发计划(农业)项目(201703D221023-2) 

主　　题：PCV2 Cap蛋白 可溶性表达 免疫原性 

摘      要：为建立猪圆环病毒2型(PCV2)山西流行毒株Cap蛋白的原核可溶性表达体系,并分析比较重组蛋白与2种商品化基因工程Cap亚单位疫苗在小鼠体内不同阶段的免疫原性,本试验以PCV2e SXJX株(GenBank登录号:MH922991.1)的ORF 2基因为基础,根据大肠埃希菌密码子偏性优化序列,将其插入原核表达载体pET-28a-c(+)中,鉴定为阳性后转入宿主菌BL21(DE3)中,经优化表达条件后,对超声破碎后的菌体上清进行纯化,分析纯化后产物的纯度和抗原性,并利用负染透射电镜观察重组Cap蛋白体外自组装成病毒样颗粒(VLPs)。分别将同等免疫剂量的PCV2e重组Cap蛋白和2种商品化PCV2基因工程亚单位疫苗免疫健康BALB/c雌鼠,应用ELISA方法检测不同阶段小鼠体内特异性抗体的水平。结果显示:重组Cap蛋白可在大肠埃希菌中表达,以完全可溶性形式存在于菌体超声波破碎后的上清中,表达产物纯化效果良好,并能被PCV2单克隆抗体识别;透射电镜观察结果发现,表达的重组Cap蛋白可以自组装成约20 mm大小的VLPs;动物免疫试验结果显示,在首免后第21天PCV2e Cap试验组抗体水平显著高于勃林格疫苗组(P0.05),表明重组蛋白在小鼠体内免疫原性良好。本试验成功构建了PCV2e Cap蛋白原核可溶性表达体系,其重组蛋白具有较好的免疫原性,为PCV2的诊断检测和亚单位基因工程疫苗的研制提供了候选抗原,并为该蛋白功能的深入研究提供了科学依据。