线粒体途径参与LASS2/TMSG1基因诱导人肺癌95C细胞凋亡的机制
Mitochondrial pathway involved in the apoptosis of human lung cancer 95C cells induced by LASS2/TMSG1 gene and its mechanism作者机构:内蒙古医科大学基础医学院病理学教研室呼和浩特010059
出 版 物:《临床与实验病理学杂志》 (Chinese Journal of Clinical and Experimental Pathology)
年 卷 期:2022年第38卷第12期
页 面:1426-1431页
学科分类:1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学]
基 金:内蒙古自治区自然科学基金(2019MS08115) 内蒙古自治区卫生健康科技计划项目(202202137)。
主 题:肺肿瘤 LASS2/TMSG1 肿瘤转移抑制基因 线粒体途径 凋亡
摘 要:目的探讨LASS2/TMSG1对人肺癌95C细胞增殖和凋亡的影响及发病机制。方法采用RT-PCR、Western blot法检测LASS2/TMSG1在人不同转移潜能肺癌细胞系95C(低转移潜能)和95D(高转移潜能)中的表达。应用慢病毒转染法将靶向沉默LASS2/TMSG1基因的LV-CERS2-RNAi(30011-1)转染至95C细胞;流式细胞术及MTT检测肿瘤细胞的体外增殖和凋亡情况;倒置显微镜观察细胞常规培养下的状态,透射电镜观察细胞线粒体超微结构的变化;荧光显微镜结合JC-1染液观察细胞线粒体膜电位的变化;Western blot法检测细胞中LASS2/TMSG1、Akt3、P-Akt3、Bax、BCL-2的表达水平。结果LASS2/TMSG1在95C细胞中的mRNA(t=16.85,P=0.004)及蛋白表达水平(t=15.26,P=0.004)明显高于95D细胞;LASS2/TMSG1沉默后,95C细胞中LASS2/TMSG1 mRNA(F=164.053,P0.001)和蛋白(F=18.293,P=0.003)的表达明显降低;流式细胞术检测LASS2/TMSG1基因沉默组细胞的凋亡率明显降低(F=17.340,P=0.003);MTT检测显示LASS2/TMSG1沉默组细胞从第4天(F=66.318,P0.001)、第5天(F=224.582,P0.001)开始,细胞增殖率明显增高;电镜和荧光显微镜观察发现,LASS2/TMSG1基因沉默,对线粒体膜电位水平的下降有干扰作用(F=14.687,P=0.005);P-Akt3蛋白(F=28.628,P0.001)及BCL-2蛋白(F=6.049,P=0.036)表达水平升高;Akt3、Bax蛋白表达量无相关性。结论LASS2/TMSG1基因可能抑制V-ATPase活性,使细胞内H+浓度升高,线粒体膜电位降低,线粒体凋亡通路中的相关蛋白释放促进95C细胞凋亡。