PEP-1肽介导人过氧化氢酶转导入人脐静脉内皮细胞

作     者：姚玲玲 王家宁 黄永章 陈龙 郭凌郧 孔霞 YAO Ling-ling;WANG Jia-ning;HUANG Yong-zhang;CHEN Long;GUO Ling-yun;KONG Xia

作者机构：郧阳医学院附属人民医院临床医学研究所 

出 版 物：《郧阳医学院学报》 (Journal of Yunyang Medical College)

年 卷 期：2007年第26卷第1期

页      面：9-12,F0003页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100104[医学-病理学与病理生理学] 10[医学] 

主　　题：过氧化氢酶 PEP-1肽 蛋白转导 脐静脉内皮细胞 

摘      要：目的:采用体外培养的人脐静脉内皮细胞株(CRL-1730),研究PEP-1肽介导人过氧化氢酶穿透细胞的能力。方法:构建原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT,将其在基因工程菌中表达出N端带有6个组氨酸“标签(His-tag)的重组蛋白,并通过金属螯合亲和层析对其进行纯化,然后将纯化得到的PEP-1-CAT融合蛋白加入体外培养的人脐静脉内皮细胞,通过Western blot来分析其转导能力。结果:测序分析证实,原核表达质粒pET15b-PEP-1-CAT重组成功。SDS-PAGE和Western blot结果表明,PEP-1-CAT在***中获得了高效表达,经Ni2+-NTA-树脂柱亲和层析纯化得到了融合蛋白PEP-1-CAT,并在体外检测到其具有特异的过氧化氢酶活性,活性值为77.1 U/g。将其加入到体外培养的内皮细胞培养基中,发现它能以剂量依赖及时间依赖的方式转导入细胞内,并能保持酶活性达48 h。结论:PEP-1-CAT融合蛋白能高效地转导入人脐静脉内皮细胞,为防治各种与氧化应激损伤有关的疾病开辟了新的途径。