从MT2和HeLa细胞及人和黑猩猩PBMC的DNA扩增出与GBV-C 高同源性的核苷酸(英文)

作     者：严杰,Reinhard H DENNIN 

作者机构：浙江大学医学院病原生物学研究所 Institute of Medical Microbiology and Hygiene Medical University of Lbeck Lbeck 23538 Germany 杭州 中国 310006 

出 版 物：《Acta Pharmacologica Sinica》 (中国药理学报(英文版))

年 卷 期：2001年第22卷第4期

页      面：34-40页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 10[医学] 

基　　金：Project supported by Germany Academic Exchange Fundation and completed in Medical University of Lübeck  Germany 

主　　题：GB肝炎剂 猴疾病 核酸序列同源性 荧光显微镜检查 DNA 人类 单核细胞 聚合酶链反应 

摘      要：目的:检测人源性细胞株DNA及人和黑猩猩外周血单核细胞(PBMC)DNA中是否存在与GBV-C基因组同源的核苷酸序列。方法:用PCR模板制备试剂盒提取MT2和HeLa细胞DNA及6例人和1例黑猩猩PBMC DNA,DNA经DNase的RNase消化后再用苯酚-氯仿提取。直接以上述DNA为模板,用GBV-C5’-NCR和NS3区引物进行套式PCR(dPCR)扩增。dPCR产物进行核苷酸序列分析,并用引物介导原位扩增(PRINS)DNA序列特异荧光标记技术确定扩增片段在染色体上的位置。结果:从MT2和HeLa细胞DNA及4例人PBMC DNA标本中获得GBV-C5’- NCR引物扩增片段。从MT2和HeLa细胞DNA及5例人和1例黑猩猩PBMC DNA标本中获得NS3区引物扩增片段。这些扩增产物的核苷酸序列与GBV-C基因组同源性为73.80％-79.15％.PRINS检测结果显示dPCR阳性的PBMC及其染色体上有荧光着色。结论:MT2和HeLa细胞DNA及人和黑猩猩PBMC DNA中存在与GBV-C5’-PCR和/或NS3区同源性较高的核苷酸序列,这些序列位于dPCR阳性的PBMC染色体上。