从炎症、凋亡与自噬评价Mtb诱导类风湿关节炎风湿热痹动物模型

作     者：富丽萍 李佳钰 陆麒瑾 蔡义思 张榆雪 袁立霞 刘刚 FU Liping;LI Jiayu;LU Qijin;CAI Yisi;ZHANG Yuxue;YUAN Lixia;LIU Gang

作者机构：南方医科大学南方医院中医药学院中药药理实验室检验与生物技术学院广州510515 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2022年第28卷第23期

页      面：44-52页

核心收录：

学科分类：100504[医学-方剂学] 1005[医学-中医学] 1002[医学-临床医学] 1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100501[医学-中医基础理论] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(82274619,82274400) 广东省自然科学基金项目(2022A1515011681)。 

主　　题：类风湿关节炎 风湿热痹 病证结合模型 凋亡 自噬 

摘      要：目的:该研究将从炎症、自噬与凋亡相关蛋白评价灭活结核分枝杆菌(Mtb)诱导类风湿关节炎风湿热痹动物模型,深入探究风湿热痹证模型组(FSR组)大鼠与佐剂性关节炎模型组(AA组)大鼠的区别,为完善RA病证结合动物模型提供更多的实验依据,以期用于防治RA的药物相关研究。方法:将30只6周龄SD大鼠随机分为3组,每组10只,分别为正常组、AA组和FSR组。AA组与FSR组注射Mtb诱导剂(1 mg/只)建立RA大鼠模型,正常组大鼠尾根部注射等体积生理盐水。FSR组连续干预16 d。实验过程中比较各组大鼠一般情况、体质量、脾脏指数、足趾肿胀度、关节炎指数(AI)、足踝关节与滑膜组织病理学改变。酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清白细胞介素-1β(IL-1β)与肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测IL-1β、TNF-α、凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)与Bcl-2相关X蛋白(Bax)、自噬相关蛋白1轻链3(LC3)、自噬关键分子酵母Atg6(Beclin1)与p62的mRNA表达水平,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax、LC3、Beclin1与p62蛋白表达水平。结果:与正常组比较,AA组和FSR组出现毛发枯槁,色泽暗淡,大便稀软甚至湿烂,体质量增长减慢,行动缓慢,脾脏肿大,足踝部关节红肿,AI升高,足踝关节与滑膜组织均出现不同程度的病理改变,ELISA结果显示血清中IL-1β、TNF-α表达水平升高,滑膜组织中IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平升高,滑膜组织Bax、p62的mRNA和蛋白表达水平降低,LC3、Beclin1、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平升高。与AA组比较,FSR组发病情况更为严重。FSR组大鼠倦怠乏力,懒动喜卧,精神颓靡,体质量增长显著减慢(P0.01),脾脏指数明显升高,脾脏明显增大(P0.05),足踝部关节显著红肿,足踝关节畸形,AI明显升高(P0.05);大鼠滑膜组织和足踝关节大量炎性细胞弥散,关节腔内大量血管翳充斥,关节破坏显著;血清IL-1β、TNF-α含量(P0.05)及滑膜组织中IL-1β、TNF-α的mRNA表达水平明显升高(P0.05);滑膜组织Bax、p62的mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05),LC3、Beclin1、Bcl-2的mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论:在Mtb诱导的基础上联合外界风湿热环境刺激,可以成功诱导具有RA风湿热痹的动物模型,与AA组比较,FSR组大鼠全身炎症程度加重,滑膜细胞凋亡水平显著降低,自噬水平显著增强,提示FSR组在RA风湿热痹研究中更具有针对性。