新型冠状病毒S蛋白RBD区的重组猫疱疹病毒的构建及鉴定

作     者：王凤杰 周鑫韬 齐宇 韩桪 蒋依倩 陈腾 扈荣良 WANG Fengjie;ZHOU Xintao;QI Yu;HAN Xun;JIANG Yiqian;CHEN Teng;HU Rongliang

作者机构：吉林农业大学长春130118 中国农业科学院长春兽医研究所长春130122 

出 版 物：《黑龙江畜牧兽医》 (Heilongjiang Animal Science And veterinary Medicine)

年 卷 期：2022年第23期

页      面：72-77,135页

学科分类：090603[农学-临床兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

主　　题：新型冠状病毒 刺突蛋白 受体结合域 猫疱疹病毒Ⅰ型 免疫原性 

摘      要：为了开发一种猫用新型冠状病毒(SARS-CoV-2)重组猫疱疹病毒活载体疫苗,试验以猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-Ⅰ)为病毒载体,采用同源重组技术将亲本病毒FHV-Z的gI和gE基因替换为SARS-CoV-2刺突蛋白(S蛋白)的受体结合域(RBD)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP蛋白)串联表达盒;利用Overlap PCR方法构建包含RBD-EGFP串联表达盒的重组质粒pUC19-RBD-EGFP,并用该重组质粒与FHV-Z基因组共同转染F81细胞,通过有限稀释法和绿色荧光病变灶筛选完成重组病毒rFHV-RBD的纯化;经PCR、测序、间接免疫荧光试验(IFA)和Western-blot方法分析重组病毒rFHV-RBD;用1×10^(7.0)TCID_(50)/mL的重组病毒rFHV-RBD滴鼻免疫猫,利用ELISA方法监测免疫后第0,7,14,21天猫体内特异性抗RBD抗体变化情况。结果表明:试验成功拯救了重组病毒rFHV-RBD,该重组病毒连续传代15代仍能检测到RBD-EGFP串联表达盒,遗传稳定性较好,重组病毒rFHV-RBD的生长特性与亲本病毒FHV-Z无明显差异,能够在重组病毒感染的F81细胞中正确表达S-RBD蛋白,滴鼻免疫猫后第21天特异性抗RBD抗体极显著升高(P0.01)。说明试验获得的重组病毒rFHV-RBD具有良好的免疫原性,可用于开展猫新型冠状病毒肺炎疫苗的研究。