欧洲型黄瓜ISSR-PCR反应体系优化及引物筛选

作     者：李丽琼 阳世莹 陈光平 木万福 吕维梧 李易蓉 杨龙 但忠 

作者机构：云南省农业科学院热区生态农业研究所 

出 版 物：《分子植物育种》 (Molecular Plant Breeding)

年 卷 期：2022年

学科分类：09[农学] 0902[农学-园艺学] 090202[农学-蔬菜学] 

基　　金：云南省省自然科学基金(202201AT070061) 云南省楚雄州彝乡科技领军人才项目共同资助 

主　　题：欧洲型黄瓜 ISSR-PCR反应体系 引物筛选 

摘      要：为实现分子标记在欧洲型黄瓜育种中的大规模应用，探究适用于欧洲型黄瓜的ISSR最优反应体系和最佳ISSR引物。本研究利用单因素试验和正交设计L(4)，分析Mg、dNTP、Taq DNA聚合酶、引物、模板DNA浓度等5个因素对欧洲型黄瓜ISSR-PCR反应体系的影响。研究表明Taq酶、dNTP以及引物浓度对PCR扩增效果有显著的影响，而DNA模板浓度对PCR扩增效果无显著影响；欧洲型黄瓜ISSR-PCR最适反应体系(20.0 μL)为：10×PCR Buffer 2.0 μL、DNA模板30 ng、0.6 μmol/L引物、0.25 mmol/L dNTPs、3 U Taq DNA聚合酶、2.5 mmol/L Mg；利用优化后的反应体系，从100条ISSR引物中筛选获得31条(占31%)扩增条带清晰和多态性丰富的引物。本研究为解析欧洲型黄瓜种质资源遗传多样性，构建指纹图谱及定位基因等提供参考。