暗色刺参的实时荧光PCR鉴定

作     者：吴姗 虞惠贞 沈旭芳 孙超 张荃 陈哲 尹文秀 张明哲 张晓峰 Wu Shan;Yu Huizhen;Shen Xufang;Sun Chao;Zhang Quan;Chen Zhe;Yin Wenxiu;Zhang Mingzhe;Zhang Xiaofeng

作者机构：杭州海关技术中心浙江杭州310016 

出 版 物：《中国海洋大学学报（自然科学版）》 (Periodical of Ocean University of China)

年 卷 期：2022年第52卷第12期

页      面：33-43页

核心收录：

学科分类：0710[理学-生物学] 1004[医学-公共卫生与预防医学(可授医学、理学学位)] 07[理学] 071007[理学-遗传学] 100403[医学-营养与食品卫生学] 10[医学] 

基　　金：海关总署科研项目(2020HK157) 浙江省重点研究发展计划项目(2018C02041) 国家重点研究发展计划项目(2017YFF0210304)资助。 

主　　题：暗色刺参 物种鉴定 实时荧光PCR 濒危物种 

摘      要：暗色刺参(Isostichopus fuscus)已被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)目录。为精确辨别和有效保护该物种,作者进行了精准鉴定暗色刺参的实时荧光PCR方法的研究。在GenBank中收集暗色刺参及近似种海参的线粒体序列,使用海参的线粒体基因中细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(Cytochrome oxidase subunitⅠgene,COⅠ)进行实时荧光PCR中引物和探针的设计。根据收集到的17种海参的25条COⅠ序列,设计了2组具有暗色刺参特异性的引物探针组合I-fu-1和I-fu-2;同时根据暗色刺参实物测序得到的COⅠ序列,设计了引物探针I-fu-3~I-fu-6。实时荧光PCR检测结果显示:I-fu-1、I-fu-3、I-fu-4、I-fu-6仅在目标物种中检测到阳性,I-fu-2和I-fu-5则在墨西哥刺参(Isostichopus badionotus)中也检测到阳性;对纯暗色刺参样本的灵敏度(指在一次荧光PCR反应中能够检测到暗色刺参的最低浓度)检测显示,I-fu-4优于I-fu-1、I-fu-3和I-fu-6,可达到0.0008 ng/μL,因此认为I-fu-4是最佳的引物探针组合。利用I-fu-4对混合物中暗色刺参进行检测,在同属近似种墨西哥刺参含量高达99.9%,暗色刺参含量低至0.05%的混合样品中,暗色刺参的实时荧光PCR检测也显示了强阳性结果。本研究建立的鉴定方法具有高特异性和灵敏度的特性,有助于快速、精准地鉴定暗色刺参。