miR-16-5p通过靶向YWHAQ调控乳腺癌耐药细胞的凋亡与迁移能力

作     者：朱海涛 毛慧兰 陶爽 王文锐 陈昌杰 杨清玲 ZHU Haitao;MAO Huilan;TAO Shuang;WANG Wenrui;CHEN Changjie;YANG Qingling

作者机构：蚌埠医学院癌症转化医学安徽省重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院肿瘤基础研究与临床检验诊断重点实验室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物技术教研室安徽蚌埠233000 蚌埠医学院生物化学与分子生物学教研室安徽蚌埠233000 

出 版 物：《南方医科大学学报》 (Journal of Southern Medical University)

年 卷 期：2022年第42卷第10期

页      面：1476-1485页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100214[医学-肿瘤学] 10[医学] 

基　　金：安徽省教育厅自然科学重大项目(KJ2019ZD28) 蚌埠医学院面上项目攀登计划(2020bypd005) 蚌埠医学院研究生科研创新计划(Byycx21001)。 

主　　题：乳腺癌 耐药 miR-16-5p YWHAQ 

摘      要：目的 探究miR-16-5p对乳腺癌紫杉醇耐药细胞生物学活性的影响及分子机制。方法 以人乳腺癌亲本细胞(SKBR-3)与乳腺癌紫杉醇耐药细胞(SKBR-3/PR)为研究对象。实验设空白对照组、阴性对照组、miR-16-5p类似物组(miR-16-5p mimics)、miR-16-5p抑制剂组(miR-16-5p inhibitor),YWHAQ干扰组(si-YWHAQ),以及联合组(miR-16-5p mimics+si-YWHAQ)。利用qRT-PCR检测乳腺癌组织与癌旁组织、SKBR-3与SKBR-3/PR间miR-16-5p的表达水平。使用生信数据对miR-16-5p的靶基因做预测,双荧光素酶实验验证靶向结合。免疫印迹检测细胞YWHAQ、Bcl-2和Bax表达。CCK-8和Transwell检测细胞增殖迁移能力。流式细胞术检测耐药细胞周期凋亡改变。结果 qRT-PCR显示乳腺癌组织中miR-16-5p水平低于癌旁组织(-1.19±1.90 vs 1.59±1.76,P0.01)。生物信息预测YWHAQ是miR-16-5p的靶基因,荧光素酶实验证实miR-16-5p能够靶向调节YWHAQ(P0.01)。相对于SKBR-3细胞,SKBR-3/PR细胞中miR-16-5p表达水平降低(P0.01),YWHAQ表达水平增高(P0.05)。Western blot结果显示miR-16-5p类似物能够抑制YWHAQ表达,miR-16-5p抑制剂能够促进YWHAQ表达(P0.01)。相对于对照组,miR-16-5p类似物能够将耐药细胞阻滞在G0/G1期[(55.61±1.99)%vs(43.06±1.53)%,P0.01],抑制细胞增殖和迁移能力(P0.01),促进细胞凋亡[(10.37±0.23)%vs(3.81±0.88)%,P0.01],YWHAQ干扰组细胞迁移能力下降,凋亡率升高,miR-16-5p类似物组与YWHAQ干扰组细胞的Bax蛋白表达增加,YWHAQ与Bcl-2蛋白水平降低。相对于miR-16-5p类似物组,联合组细胞迁移能力被抑制(75.75±29.85 vs 181.11±11.71,P0.01),凋亡率显著升高[(24.20±2.43)%vs(14.10±4.47)%,P0.01]。结论 miR-16-5p能够通过靶向调节YWHAQ调控Bcl-2/Bax的表达,从而改变乳腺癌紫杉醇耐药细胞的生物学活性。