鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失疫苗株的三重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法的建立

作     者：宋影影 刘英楠 刘建奇 谢振华 于婉琪 吕璐 钟秋萍 宋庆庆 陈鸿军 SONG Ying-ying;LIU Ying-nan;LIU Jian-qi;XIE Zhen-hua;YU Wan-qi;LÜLu;ZHONG Qiu-ping;SONG Qing-qing;CHEN Hong-jun

作者机构：中国农业科学院上海兽医研究所上海200241 中国农业科学院生物安全研究中心上海200241 金宇保灵生物制药有限公司内蒙古呼和浩特010030 

出 版 物：《中国兽医科学》 (Chinese Veterinary Science)

年 卷 期：2022年第52卷第8期

页      面：939-945页

学科分类：090601[农学-基础兽医学] 09[农学] 0906[农学-兽医学] 

基　　金：自然科学基金联合基金项目重点支持项目-区域创新发展联合基金项目(U19A2039)。 

主　　题：非洲猪瘟病毒 B646L EP402R MGF360-13L TaqMan探针 荧光定量PCR 

摘      要：为建立一种鉴别非洲猪瘟野毒株与基因缺失疫苗株的TaqMan探针荧光定量PCR检测方法,根据非洲猪瘟病毒(ASFV)的B646L、EP402R、MGF360-13L基因序列,分别设计PCR引物和TaqMan探针,绘制标准曲线,并进行重复性试验、特异性试验、敏感性试验与临床样品检测,建立三重TaqMan探针荧光定量PCR检测方法。结果显示,以B646L、EP402R和MGF360-13L重组质粒为标准品绘制的标准曲线具有良好的线性关系,线性相关系数(R^(2))分别为0.995、0.997和0.997;建立的方法与多种猪常见病原不存在交叉反应,特异性良好;对B646L、MGF 360-13L与EP402R基因的检测下限均为10^(2.5) copies/μL,变异系数均2%,该方法灵敏度高;当临床样品稀释至10^(-5)时,即滴度为10^(2.5)TCID_(50)/mL时仍能检测到病毒粒子,具有较高的临床使用价值。本研究建立了一种高效、灵敏、特异的ASFV分子检测方法,对ASF风险预警具有重要意义。