塞来昔布调节miR-129-5p/HMGB1抑制TNF-α诱导类风湿关节炎成纤维样滑膜细胞炎症因子分泌

作     者：时萍 陶野 王晨静 李欣 柳艳平 曹玉 SHI Ping;TAO Ye;WANG Chenjing;LI Xin;LIU Yanping;CAO Yu

作者机构：青岛大学附属医院山东青岛266001 

出 版 物：《中国比较医学杂志》 (Chinese Journal of Comparative Medicine)

年 卷 期：2022年第32卷第9期

页      面：82-89页

学科分类：10[医学] 

主　　题：类风湿关节炎 炎症因子 塞来昔布 微小RNA-129-5p 高迁移率族蛋白1 

摘      要：目的 探讨塞来昔布对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLSs)MH7A炎症因子分泌的影响及其机制。方法 以0、2.5、5、10、20和40μmol/L塞来昔布处理MH7A细胞24 h后,采用噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力以筛选无毒性作用浓度;采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blot法分别检测2.5、5、10μmol/L塞来昔布处理TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中炎症因子白细胞介素(IL)-6、IL-1β水平和微小RNA(miR)-129-5p表达水平以及高迁移率族蛋白1(HMGB1)表达水平;双荧光素酶报告基因实验检测miR-129-5p和HMGB1的靶向关系;转染miR-129-5p mimics或HMGB1-siRNA至MH7A细胞中,观察miR-129-5p过表达或下调HMGB1表达对TNF-α诱导的MH7A细胞炎症因子分泌的影响;另外,将miR-129-5p inhibitor转染至TNF-α诱导的MH7A细胞中,观察miR-129-5p低表达对10μmol/L塞来昔布作用下TNF-α诱导MH7A细胞炎症因子分泌的影响。结果 与0μmol/L比较,2.5、5、10μmol/L塞来昔布处理后MH7A细胞活性差异无统计学意义(P0.05),但20和40μmol/L塞来昔布处理后MH7A细胞活性明显降低(P0.05)。在TNF-α诱导下,2.5、5、10μmol/L塞来昔布可呈浓度依赖性抑制MH7A细胞上清液中IL-6、IL-1β水平和细胞中HMGB1蛋白表达并促进miR-129-5p表达;miR-129-5p可与HMGB1靶向结合,且miR-129-5p可负向调控HMGB1蛋白表达;miR-129-5p过表达或下调HMGB1表达后,TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中IL-6、IL-1β水平明显降低(P0.05);并且,miR-129-5p低表达可明显逆转10μmol/L塞来昔布对TNF-α诱导的MH7A细胞上清液中IL-6、IL-1β水平抑制作用。结论 塞来昔布可抑制TNF-α诱导MH7A细胞炎症因子分泌,其作用机制可能与调控miR-129-5p/HMGB1有关。