小麦酵母双杂交文库构建及文库质量的鉴定

作     者：李立群 王冰心 吕千 杨智全 LI Liqun;WANG Bingxin;LÜQian;YANG Zhiquan

作者机构：西北农林科技大学农学院陕西杨凌712100 

出 版 物：《西北农业学报》 (Acta Agriculturae Boreali-occidentalis Sinica)

年 卷 期：2022年第31卷第8期

页      面：948-957页

核心收录：

学科分类：09[农学] 0901[农学-作物学] 

基　　金：陕西省农业协同创新与推广联盟重大科技项目(LMZD202104) 西北农林科技大学实验技术研究与实验室管理创新项目(SY20210227) 

主　　题：小麦 酵母双杂交文库 自激活检测 文库筛选 

摘      要：以中国春小麦叶、茎、幼穗及花后3、6、9、12、15、20、25d的籽粒为材料,利用Gateway技术构建中国春小麦cDNA初级文库和次级文库,由次级文库质粒转化Y187酵母菌株构建出酵母双杂交文库。通过mating法筛选小麦粒质量基因TaDAR1的互作蛋白,以此来鉴定文库的有效性。结果表明:初级文库容量为1.82×10^(7) CFU/mL、次级文库的容量为1.91×10^(7) CFU/mL,文库重组率均大于96%,插入片段平均长度在1000bp以上。酵母双杂交文库转化效率为1.97×10^(5)CFU/μg,文库容量为2.04×10^(7)CFU/mL。构建诱饵载体pGBKT7-TaDAR1并转化Y2H酵母菌株,经检验存在自激活现象,进一步截断检测发现此蛋白N端无自激活,C端有自激活,以BD-TaDAR1-N为诱饵载体,筛选酵母文库,获得其互作蛋白序列,并命名为Ta-DAR1IP,经回转验证TaDAR1-N与TaDAR1IP存在相互作用关系。表明本试验方案构建的酵母文库是高质量的有效的。为初学者构建酵母双杂文库及使用“mating法筛选酵母文库提供借鉴,也为后续小麦基因功能的研究奠定基础。