哺乳动物悬浮细胞表达系统进行膜蛋白制备的优化

作     者：马骋 宫彩霞 MA Cheng;GONG Caixia

作者机构：浙江大学医学院蛋白质平台浙江杭州310050 浙江大学医学院附属第一医院老年病科浙江杭州310050 浙江省增龄与理化损伤性疾病诊治研究重点实验室浙江杭州310050 

出 版 物：《实验技术与管理》 (Experimental Technology and Management)

年 卷 期：2022年第39卷第7期

页      面：42-49,67页

学科分类：0710[理学-生物学] 071010[理学-生物化学与分子生物学] 07[理学] 

基　　金：浙江大学实验技术研究项目(SJS202014) 国家自然科学基金项目(32000707)。 

主　　题：哺乳动物细胞 悬浮培养 膜蛋白 表达制备 

摘      要：为提高哺乳动物悬浮细胞表达系统用于日常膜蛋白表达制备的实用性、可控性及效率,改善传统工艺缺乏快速检测和质控的方法、缺乏快速且高通量的目的蛋白及融合标签的筛选策略等方面的不足,设计了新的pf系列质粒,优化并建立关联的检测方法,实现了病毒滴度在转染和扩增阶段的随时监测,并缩短了定量测量病毒感染效力的周期;同时设计了新的筛选策略和ESNX质粒系列,实现了目的蛋白和融合标签质粒库的快速构建以及对其表达效果的快速、高通量检测筛选。基于新质粒和对应使用方案的膜蛋白表达制备新体系提高了效率、实用性和可控性,可以简单地再现并用于各实验室,为膜蛋白的结构、功能等各方面研究提供助力。