类鼻疽伯克霍尔德菌AraC转录因子基因的原核表达及纯化

作     者：曾慧 黄玮晨 高洁 江昱颖 胡琪 修皓 ZENG Hui;HUANG Wei-chen;GAO Jie;JIANG Yu-ying;HU Qi;XIU Hao

作者机构：海南医学院热带医学院海南海口571199 

出 版 物：《中国病原生物学杂志》 (Journal of Pathogen Biology)

年 卷 期：2022年第17卷第7期

页      面：761-765页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：海南省自然科学基金项目(No.819QN236) 海南医学院科研培育基金项目(No.HYPY201904) 海南医学院大学生创新创业训练计划项目(No.X202011810024)。 

主　　题：类鼻疽伯克霍尔德菌 AraC转录因子 原核表达 

摘      要：目的从海南类鼻疽伯克霍尔德菌菌株BPHN001中克隆得到AraC转录因子基因,构建类鼻疽伯克霍尔德菌(Burkholderia pseudomallei)AraC转录因子基因原核表达质粒,对该转录因子基因进行原核表达,并对表达产物进行纯化。方法根据AraC转录因子基因设计特异性扩增引物,将PET-28a(+)质粒和扩增得到的AraC转录因子基因产物同时用BamHⅠ和HindⅢ双酶切,构建带His标签的重组质粒。经测序验证后,将重组质粒转化至大肠埃希菌BL21(DE3),采用最佳浓度IPTG进行诱导,采用SDS-PAGE鉴定重组蛋白的表达情况。通过Ni^(2+)柱纯化目的蛋白,采用Western blot检测纯化蛋白的免疫反应性。结果特异性引物扩增得到的产物大小约为1000 bp,与目的基因片段1032 bp基本一致。将扩增产物与PET-28a(+)载体连接后测序,与预期完全一致。重组载体转化BL21(DE3)后用最适IPTG浓度(0.5 mmol/L)诱导过夜(约16 h),SDS-PAGE检测表达产物分子质量在40~55 ku之间,与预期相符。表达蛋白纯化后进行Western blot,能被相应抗体识别。结论成功克隆得到AraC转录因子基因,,构建的含AraC转录因子基因原核表达载体转化DE3后经IPTG诱导可表达出融合蛋白,经Ni^(2+)柱纯化得到具有免疫反应原性的AraC转录因子蛋白,为AraC转录因子的功能研究奠定了基础。