维替泊芬在实验性哮喘气道重塑中的作用及其机制

作     者：刘敏 王艺颖 简鼎 李媛媛 张光莉 罗征秀 Liu Min;Wang Yi-Ying;Jian Ding;Li Yuan-Yuan;Zhang Guang-Li;Luo Zheng-Xiu

作者机构：重庆医科大学附属儿童医院呼吸科/儿童发育疾病研究教育部重点实验室/国家儿童健康与疾病临床医学研究中心/儿童发育重大疾病国家国际科技合作基地/儿科学重庆市重点实验室重庆400014 

出 版 物：《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2022年第47卷第8期

页      面：745-755页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：重庆英才计划(CQYC2020030393) 重庆市自然科学基金(cstc2020jcyj-msxmX0677) 重庆市渝中区科委项目(20200156) 

主　　题：Hippo/YAP信号通路 维替泊芬 哮喘 气道重塑 

摘      要：目的 探讨维替泊芬(Vp)在实验性哮喘气道重塑中的作用及其机制。方法 (1)动物实验:将12只雌性BALB/c小鼠分为对照组、实验性哮喘组与Vp干预组,每组4只。实验性哮喘组小鼠使用屋尘螨提取液(HDM)滴鼻建立哮喘模型,Vp干预组在HDM激发前腹腔注射Vp进行干预,对照组给予等量生理盐水。收集小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(BALF),采用HE染色、Masson染色、过碘酸希夫(PAS)染色观察肺组织病理变化,瑞氏-吉姆萨染色计数BALF中的炎性细胞;采用免疫组化检测肺组织中Yes相关蛋白(YAP)、磷酸化Yes相关蛋白(p-YAP)的表达情况,RT-PCR、Western bloing检测肺组织中YAP、p-YAP、骨桥蛋白(OPN)、平滑肌肌球蛋白重链(SMMHC)的表达情况。(2)细胞实验:将人气道平滑肌细胞(HASMC)分为对照组(加入等量生理盐水)、HDM组(加入50μg/ml HDM作用24 h)与HDM+Vp组(加入0.05 mg/L Vp刺激2 h后,加入50μg/ml HDM作用24 h),采用CCK-8法检测细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测YAP、OPN、SMMHC蛋白表达情况。结果 (1)动物实验:实验性哮喘组肺组织炎症较对照组加重,支气管基底膜、气道平滑肌及支气管管壁明显增厚[(1.13±0.38)μm vs.(0.79±0.36)μm,(6.49±2.36)μm vs.(4.56±1.52)μm,(33.85±5.95)μmvs.(22.08±3.30)μm,P0.05],气道周围胶原纤维沉积面积、PAS染色阳性面积明显增加(5.85%±2.35%vs. 0.36%±0.12%,28.81%±5.89%vs. 13.57%±2.08%,P0.01),肺组织中YAP、OPN mRNA和蛋白表达水平明显升高(P0.05或P0.01),p-YAP/YAP比值、SMMHC mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05或P0.01)。与实验性哮喘组比较,Vp干预组小鼠肺组织炎症减轻,支气管基底膜、气道平滑肌及支气管管壁明显变薄[(0.93±0.27)μm、(4.99±1.75)μm、(26.59±2.76)μm,P0.05],气道周围胶原纤维沉积面积、PAS染色阳性面积明显减少(2.14%±0.89%、17.92%±1.89%,P0.05),肺组织YAP、OPN mRNA和蛋白表达水平明显降低(P0.05或P0.01),p-YAP/YAP比值、SMMHC mRNA和蛋白表达水平明显增高(P0.05)。(2)细胞实验:与对照组比较,HDM组细胞增殖能力增强(0.2874±0.0055 vs. 0.2626±0.0051,P0.01)、凋亡率降低(5.14%±0.82%vs.6.75%±0.21%,P0.05),YAP、OPN蛋白表达升高(3.14±0.48 vs. 1.51±0.61,5.87±2.42vs.0.94±0.23,P0.01),SMMHC蛋白表达降低(0.80±0.19vs.2.96±0.96,P0.01)。与HDM组比较,HDM+Vp组细胞增殖能力减弱(0.2748±0.0043,P0.05),凋亡率升高(6.29%±0.49%,P0.05),YAP、OPN蛋白表达降低(2.02±0.53、2.93±1.09,P0.05),SMMHC蛋白表达升高(2.11±0.85,P0.05)。结论 Vp可降低YAP的表达,减少YAP核移位,逆转HASMC表型转化,这可能是其抑制实验性哮喘气道重塑的机制。