N-甲基-4-异亮氨酸环孢素通过抑制线粒体通透性转换孔减轻凋亡诱导因子的核易位和细胞凋亡

作     者：曾玥 罗思晴 马鑫喆 潘泓乐 刘红梅 张鸣号 ZENG Yue;LUO Siqing;MA Xinzhe;PAN Hongyue;LIU Hongmei;ZHANG Minghao

作者机构：宁夏医科大学银川750004 宁夏医科大学基础医学院银川750004 国家卫健委代谢性心血管疾病研究重点实验室银川750004 

出 版 物：《宁夏医科大学学报》 (Journal of Ningxia Medical University)

年 卷 期：2022年第44卷第7期

页      面：663-668,676页

学科分类：1007[医学-药学(可授医学、理学学位)] 1006[医学-中西医结合] 100706[医学-药理学] 100602[医学-中西医结合临床] 10[医学] 

基　　金：宁夏自然科学基金项目(2021AAC03122) 宁夏回族自治区重点研发计划项目(2021BEG03093) 宁夏回族自治区大学生创新创业训练计划项目(S202010752030) 

主　　题：鱼藤酮 小鼠海马神经元 细胞凋亡 N-甲基-4-异亮氨酸环孢素 氧化应激 线粒体损伤 

摘      要：目的探讨鱼藤酮诱导小鼠海马神经元HT22细胞凋亡的机制,观察环孢素A(cyclosporin A,CsA)衍生物N-甲基-4-异亮氨酸环孢素(N-methyl-4-isoleucine-cyclosporin,NIM811)对鱼藤酮诱导的HT22细胞毒性的保护作用。方法使用线粒体复合物Ⅰ抑制剂鱼藤酮培养小鼠海马神经元HT22细胞,使用第3~7代的HT22细胞,分成control组、鱼藤酮组、鱼藤酮+NIM811组和NIM811组。NIM811在鱼藤酮刺激3 h前加入培养基。采用Alamar Blue法检测HT22细胞活性,二氢乙二胺(DHE)荧光探针测定细胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的含量,四甲基罗丹明甲酯(tetramethylrhodamine methyl ester,TMRM)测定线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)。鱼藤酮孵育24 h后,提取细胞胞浆和胞核蛋白,Western blot检测细胞核中凋亡诱导因子(apoptosis-inducing factor,AIF)及胞浆中细胞色素C(cytochrome C,cyto C)、caspase-9、Bax和Bcl-2的蛋白表达。结果鱼藤酮使HT22细胞活力降低至56.26%(P0.01),细胞明显缩小,核浓缩,细胞周围形成透明圈。ROS产生增加(P0.05),MMP降低(P0.01),AIF核易位,并引起线粒体cyto C释放和caspase-9激活,Bax蛋白表达增加(P0.01),Bcl-2蛋白表达降低(P0.01)。NIM811预处理增强了细胞活力,降低了ROS的产生,维持了线粒体膜电位,抑制了AIF核易位,减轻了线粒体cyto C的释放和caspase-9的激活,抑制Bax蛋白表达增加和Bcl-2蛋白表达降低。结论NIM811通过抑制ROS的产生,维持线粒体MMP,抑制线粒体通透性转换孔(mitochondrial permeability transition pore,MPTP)的形成,减少线粒体cyto C的释放,减轻AIF核易位,从而减轻鱼藤酮诱导的HT22细胞凋亡,对帕金森病具有保护作用。