牦牛RBM3的基因克隆及其在不同繁殖时期卵巢、输卵管、子宫中的表达定位

作     者：张晖 潘阳阳 王靖雷 张瑞 黄嘉馨 余四九 崔燕 ZHANG Hui;PAN Yangyang;WANG Jinglei;ZHANG Rui;HUANG Jiaxin;YU Sijiu;CUI Yan

作者机构：甘肃农业大学动物医学院兰州730070 

出 版 物：《畜牧兽医学报》 (ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA)

年 卷 期：2022年第53卷第7期

页      面：2202-2214页

核心收录：

学科分类：0905[农学-畜牧学] 09[农学] 

基　　金：甘肃省教育厅产业支撑引导项目(2019C-03) 国家自然科学基金(31972760,32160859) 甘肃省杰出青年基金(20JR10RA561) 

主　　题：牦牛 生殖调控 RNA结合基序蛋白3 冷应激 

摘      要：旨在研究RBM3在牦牛(Bos grunniens)生殖相关调控中的作用。本研究以卵泡期、黄体期和妊娠期4~6岁健康雌性牦牛各3头为采集对象,采集其卵巢、子宫和输卵管共9组试验样品,每组设置3个生物学重复。利用基因克隆技术克隆牦牛RBM3基因并进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot,WB)分别在基因层面和蛋白层面检测RBM3在牦牛子宫、卵巢和输卵管中的相对表达量;利用免疫组织化学(immunocytochemistry,IHC)方法检测RBM3蛋白在试验样品中的分布定位。牦牛RBM3基因(GenBank No.:MF142258.1)被成功克隆并预测出二、三级结构,发现其与野牦牛亲缘性最近,基因编码区第51位、98位核苷酸不同于常见哺乳动物,生物信息学分析预测其编码的蛋白质为稳定的非跨膜蛋白。RBM3蛋白在本试验9组样品的表达量有如下差异:在卵巢中,黄体期显著高于卵泡期和妊娠期(P0.05);输卵管中,卵泡期显著低于黄体期和妊娠期(P0.05);子宫上,卵泡期显著高于黄体期和妊娠期(P0.05)。免疫组织化学结果显示,RBM3在卵巢中的主要表达位置是卵泡膜、颗粒层和黄体细胞;在输卵管的表达位置是黏膜上皮;子宫上的表达主要以子宫内膜和子宫腺为主。本研究结果提示,RBM3可能参与牦牛个体发情周期和妊娠过程的调控以及妊娠识别等过程,为RBM3这一冷应激调节因子参与牦牛对高原环境的适应性生理机制方面的研究提供参考。