免疫分子B7-H3对骨关节炎成纤维样滑膜细胞生物学功能的影响

作     者：周恒信 丁思思 孙丽丽 常新 刘翠平 Zhou Hengxin;Ding SLsi;Sun Lili;Chang Xin;Liu Cuiping

作者机构：苏州大学附属第一医院江苏省临床免疫研究所江苏省教育厅重点实验室苏州215021 苏州大学附属第一医院风湿免疫科苏州215008 

出 版 物：《中华风湿病学杂志》 (Chinese Journal of Rheumatology)

年 卷 期：2022年第26卷第3期

页      面：145-151,I0002,I0003页

学科分类：1002[医学-临床医学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(81873876,82001723,81801595) 姑苏卫生人才项目(GSWS2020011)。 

主　　题：骨关节炎 滑膜 成纤维样滑膜细胞 B7-H3 生物学功能 

摘      要：目的探讨免疫分子B7-H3对OA成纤维样滑膜细胞(FLS)生物学功能的影响。方法获取OA膝关节滑膜组织5例和正常膝关节滑膜组织4例,并分离、培养原代细胞株。以OA滑膜组织和原代OA-FLS为研究对象,利用免疫组织化学染色、realtime-PCR、流式细胞术研究OA滑膜组织B7-H3表达情况。根据B7-H3996及1041位点设计相应siRNA沉默并下调OA-FLS中B7-H3的表达,通过蛋白质印迹法、流式细胞术测定靶细胞B7-H3蛋白抑制情况,划痕实验、Transwell实验分析其迁移、侵袭能力,CCK-8法检测细胞增殖能力,CBA法检测细胞培养上清细胞因子及趋化因子表达。使用GraphPad Prism 8.0软件分析实验数据,正态分布数据用±s表示,数据间两两比较采用t检验,以P0.05为差异有统计学意义。结果B7-H3分子在OA膝关节滑膜组织中FLS异常高表达。相比于siNC,si996、si1041可以抑制OA-FLS中B7-H3的表达。在Transwell迁移实验中,OA-FLS迁移能力下降[siNC组和si996组(100.3±3.7)个/视野和(48.7±1.2)个/视野,t=13.24,P0.001;siNC组和si1041组(100.3±3.7)个/视野和(59.7±1.9)个/视野,t=9.80,P0.001]。在Transwell侵袭实验中,表明侵袭能力下降[siNC组和si996组(127.3±5.6)个/视野和(39.7±3.3)个/视野,t=13.49,P0.001;siNC组和si1041组(127.3±5.6)个/视野和(57.3±1.9)个/视野,t=11.85,P0.001]。沉默B7-H3基因可以抑制OA-FLS细胞因子IL-6[siNC组和si996组(248±21)pg/ml和(111±12)pg/ml,t=24.08,P=0.002;siNC组和si1041组(248±21)pg/ml和(46±5)pg/ml,t=13.21,P=0.006]、IL-8[siNC组和si996组(118.1±15.6)pg/ml和(47.1±5.4)pg/ml,t=6.68,P=0.022;siNC组和si1041组(118.1±15.6)pg/ml和(10.0±1.3)pg/ml,t=13.08,P=0.006]和趋化因子CXCL8[siNC组和si996组(178.8±6.4)ng/ml和(83.2±2.7)ng/ml,t=13.77,P=0.005;siNC组和si1041组(178.8±6.4)ng/ml和(93.5±2.8)ng/ml,t=12.23,P=0.007],CCL2[siNC组和si996组(184.1±5.1)ng/ml和(109.4±5.9)ng/ml,t=9.57,P=0.011;siNC组和si1041组(184.1±5.1)ng/ml和(97.1±1.5)ng/ml,t=16.39,P=0.004]的分泌。结论B7-H3可能对OA-FLS的迁移、侵袭及细胞因子分泌等生物学功能有一定的调控作用,为进一步研究B7-H3参与OA发病机制提供了线索。