应用磁性分选方法从人脐血中分离极小类胚胎干细胞

作     者：王芳 刘晋辉 何吉 朱发明 吕杭军 

作者机构：浙江省血液中心卫生部血液安全研究重点实验室浙江杭州310006 

出 版 物：《中国输血杂志》 (Chinese Journal of Blood Transfusion)

年 卷 期：2013年第26卷第9期

页      面：847-849页

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100102[医学-免疫学] 10[医学] 

基　　金：浙江省医药卫生科学研究基金(2011RCA018) 

主　　题：极小类胚胎干细胞 脐血 磁性分选 

摘      要：目的建立从人脐血中分离极小类胚胎干细胞的磁性分选方法。方法脐带血标本与0.9%生理盐水以1∶1充分混匀,形成单细胞悬液层加到比重为1.077 g/mL的淋巴细胞分离液上,经密度梯度离心收集单个核细胞层。应用Lineage Cell Depletion Kit、CD45 MicroBeads、CD133 MicroBead Kit和CD34 MicroBead Kit进行磁性分选。应用流式细胞术分别检测分选的细胞群的表面标志。利用兔抗人Oct4与Nanog单克隆抗体和鼠抗兔IgG二抗分别检测分选细胞核内Oct-4和Nanog表达。RT-PCR检测分选细胞的Oct-4和Nanog mRNA表达。通过与人正常红细胞比较分析细胞大小。结果磁性分选获得Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+这2群细胞。免疫荧光法检测显示这2群细胞中均表达Oct-4和Nanog。RQ-PCR结果显示2群细胞均表达Oct-4和Nanog转录子。瑞氏染色镜下可见Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+这2群细胞大小比正常红细胞小,且核质比高。结论应用磁性分选方法可获得表达Lin-CD45-CD133+和Lin-CD45-CD34+的极小类胚胎干细胞。