慢病毒介导hsa-miR-199a-5p通过转化生长因子-β/Smad通路抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞纤维化的研究
Inhibitory effect of hsa-miR-199a-5p mediated by lentivirus on keloid fibroblast fibrosis through TGF-β/Smad pathway作者机构:广东医科大学附属医院整形外科湛江524001 柳州市工人医院普通外科(乳腺)柳州547000
出 版 物:《中华整形外科杂志》 (Chinese Journal of Plastic Surgery)
年 卷 期:2022年第38卷第5期
页 面:570-577页
核心收录:
学科分类:1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100101[医学-人体解剖与组织胚胎学] 10[医学]
基 金:湛江市非资助科技攻关计划项目(2020B01010) 广东医科大学科研基金(GDMUM2020028)。
主 题:瘢痕疙瘩 成纤维细胞 微RNAs hsa-miR-199a-5p 胶原 纤维化
摘 要:目的探讨hsa-miR-199a-5p对瘢痕疙瘩成纤维细胞(KFs)纤维化过程的影响及其与转化生长因子(TGF)-β/Smad信号通路的关系。方法将携带hsa-miR-199a-5p基因的慢病毒载体(hsa-miR-199a-5p组)及空白慢病毒载体(rLv-NC组)感染KFs, 并设空白对照组(KFs正常培养)。采用CCK-8法检测各组KFs的增殖情况。慢病毒感染KFs 48 h后, 应用实时定量PCR(qRT-PCR)检测各组KFs的hsa-miR-199a-5p表达水平, 流式细胞仪检测细胞凋亡情况, Transwell实验检测细胞侵袭能力, 并分别采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Smad3及TGF-β1的mRNA和蛋白表达水平。结果病毒感染KFs 48 h后, hsa-miR-199a-5p组的hsa-miR-199a-5p表达量明显高于rLv-NC组和空白对照组, 差异有统计学意义(P0.01);与rLv-NC组和空白对照组相比, hsa-miR-199a-5p组的细胞增殖率、侵袭性均有所降低, 细胞凋亡率有所升高, 差异有统计学意义(P0.01);hsa-miR-199a-5p组的Ⅰ、Ⅲ型胶原、α-SMA、Smad3、TGF-β1的mRNA及蛋白表达水平均明显低于rLv-NC组和空白对照组, 差异有统计学意义(P0.01)。结论 hsa-miR-199a-5p可能通过抑制TGF-β/Smad通路的表达, 抑制KFs增殖与侵袭, 并促进KFs凋亡, 从而抑制瘢痕疙瘩纤维化。