骨桥蛋白表达水平对多房棘球蚴原头节生长发育的影响

作     者：卓怡呈 杨海成 刘程豪 张宝财 多小勇 张示杰 ZHUO Yi-cheng;YANG Hai-cheng;LIU Cheng-hao;ZHANG Bao-cai;DUO Xiao-yong;ZHANG Shi-jie

作者机构：石河子大学医学院石河子832000 石河子大学医学院第一附属医院肝胆外科石河子832000 

出 版 物：《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 (Chinese Journal of Parasitology and Parasitic Diseases)

年 卷 期：2022年第40卷第3期

页      面：299-305页

核心收录：

学科分类：1001[医学-基础医学(可授医学、理学学位)] 100103[医学-病原生物学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金(8176120052) 

主　　题：多房棘球绦虫 骨桥蛋白 原头节 生长发育 

摘      要：目的 探讨骨桥蛋白(OPN)表达水平对多房棘球蚴原头节生长发育的影响。方法 从感染多房棘球蚴的长爪沙鼠体内分离原头节,体外培养3 d后,分为沉默EmOPN (LV-EmOPN-734)组、沉默对照(LV3-NC)组、过表达EmOPN (LV-EmOPN-0423)组、过表达对照(LV5-NC)组等4组,每组设置3个平行孔,每孔含原头节约5 000个。LV-EmOPN-734组中加入LV-EmOPN-734慢病毒稀释液(终浓度为1.4×10^(7 )TU/ml)、LV-EmOPN-0423组中加入LV-EmOPN-0423慢病毒稀释液(终浓度为4.83×10^(8)拷贝/ml),相应对照组加入等量的慢病毒稀释液(空质粒)。感染后72 h,荧光显微镜下观察各组原头节的荧光强度,蛋白质免疫印迹(Western blotting)检测原头节中OPN的相对表达量,半胱天冬氨酸蛋白酶-3 (Caspase-3)检测试剂盒检测原头节Caspase-3活性,EdU细胞成像试剂盒检测原头节增殖能力。感染后72 h,将原头节与大鼠肝癌细胞共培养8~12周,扫描电镜下观察多房棘球蚴囊泡生发层的显微结构。采用t检验对组间差异进行统计学分析。结果 慢病毒感染原头节后72 h,荧光显微镜下可见慢病毒侵入原头节内,呈环状或点状分布。Western blotting结果显示,LV-EmOPN-734组EmOPN相对表达量为0.43±0.04,低于LV3-NC组的0.80±0.07 (t=8.623,P0.01);LV-EmOPN-0423组EmOPN相对表达量为1.18±0.21,高于LV5-NC组的0.73±0.06 (t=3.333,P0.05)。Caspase-3活性检测结果显示,LV-EmOPN-734组Caspase-3活性为(61.55±1.64)μmol/L,高于LV3-NC组的(28.20±2.16)μmol/L (t=24.57,P0.01);LV-EmOPN-0423组Caspase-3活性为(50.11±6.45)μmol/L,低于LV5-NC组的(78.22±16.43)μmol/L (t=3.185,P0.05)。EdU细胞成像试剂盒检测结果显示,LV-EmOPN-734组EdU+原头节数/总原头节数为0.47±0.06,低于LV3-NC组的0.72±0.10 (t=3.663,P0.05);LV-EmOPN-0423组EdU+原头节数/总原头节数为0.81±0.09,高于LV5-NC组的0.54±0.06 (t=4.309,P0.05)。扫描电镜观察结果显示,LV-EmOPN-734组囊泡生发层细胞出现塌陷、皱缩、脱落,失去正常结构;LV-EmOPN-0423组囊泡生发层细胞膜完整,形态饱满,形成生发小囊并长出小蒂与生发层相接。结论 OPN表达水平的升高/降低可促进/抑制多房棘球蚴原头节的生长发育。