基于lncRNA/miRNA/NF-κB通路探讨针刀对膝骨关节炎兔的软骨保护作用机制

作     者：伍闲 宋小鸽 卢曼 夏帅 佘泽宇 卢梦雅 丁双 尚祥 耿凯 林秀华 杨永晖 WU Xian;SONG Xiaoge;LU Man;XIA Shuai;SHE Zeyu;LU Mengya;DING Shuang;SHANG Xiang;GENG Kai;LIN Xiuhua;YANG Yonghui

作者机构：安徽中医药大学合肥230038 安徽省中西医结合医院 

出 版 物：《北京中医药大学学报》 (Journal of Beijing University of Traditional Chinese Medicine)

年 卷 期：2022年第45卷第6期

页      面：603-611页

核心收录：

学科分类：1005[医学-中医学] 100512[医学-针灸推拿学] 10[医学] 

基　　金：国家自然科学基金项目(No.81774436) 

主　　题：针刀 膝骨关节炎 长链非编码RNA 核因子κB 小核仁RNA宿主基因1 miR-16-5p 转化生长因子β miR-223-3p 兔 

摘      要：目的观察针刀对膝骨关节炎(KOA)兔膝关节软骨长链非编码RNA(lncRNA)/微小RNA(miRNA)/核因子κB(NF-κB)通路的影响,探讨针刀对KOA的软骨保护作用机制。方法将新西兰兔随机分为空白对照组、模型组与针刀组,每组9只。采用Videman固定法建立KOA兔模型,造模后针刀组给予针刀干预,1次/周,连续3周。3周后各组取材膝关节软骨组织,运用HE染色观察软骨组织的病理学改变,扫描电镜观察软骨组织损伤情况。使用RT-qPCR法分析lncRNA小核仁RNA宿主基因1(lncRNA-SNHG1)、转化生长因子β激活的lncRNA(lncRNA-ATB)、miR-16-5p、miR-223-3p及环氧化酶2(COX-2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、NF-κB p65、核因子抑制蛋白κB(IκBα)mRNA的表达;Western blotting分析NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-NF-κB p65)、IκBα、磷酸化IκBα(p-IκBα)、COX-2、iNOS的蛋白表达;ELISA法测定IL-6、TNF-α的蛋白表达量。对lncRNA-SNHG1相对表达量与miR-16-5p相对表达量,lncRNA-ATB相对表达量与miR-223-3p相对表达量分别作相关性分析。结果光学显微镜与扫描电镜观察表明,KOA兔软骨组织有明显损伤,针刀干预后损伤有一定程度的修复。与空白对照组比较,模型组膝关节软骨组织NF-κB p65、IκBα、COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α的mRNA表达水平及lncRNA-ATB、miR-16-5p表达水平升高(P0.01),lncRNA-SNHG1、miR-223-3p表达水平降低(P0.01);模型组p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα值及COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α蛋白表达水平升高(P0.01)。与模型组比较,针刀组兔膝关节软骨组织IκBα、COX-2、iNOS、IL-6、NF-κB p65、TNF-αmRNA及lncRNA-ATB、miR-16-5p表达水平降低(P0.05或P0.01),lncRNA-SNHG1、miR-223-3p表达水平升高(P0.01);针刀组p-NF-κB p65/NF-κB p65、p-IκBα/IκBα值及COX-2、iNOS、IL-6、TNF-α的蛋白表达水平降低(P0.01)。lncRNA-SNHG1相对表达量与miR-16-5p相对表达量、lncRNA-ATB相对表达量与miR-223-3p相对表达量负相关(P0.01)。结论针刀疗法保护KOA兔膝关节软骨的作用机制可能与lncRNA-SNHG1/miR-16-5p、lncRNATB/miR-223-3p通路共同影响NF-κB信号通路有关。