miR-181a调控PINK1/Parkin通路对骨质疏松大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响

作     者：祝震亚 童蕾 陆燕群 Zhu Zhen-Ya;Tong Lei;Lu Yan-Qun

作者机构：嘉兴市中医医院骨科浙江嘉兴314001 

出 版 物：《解放军医学杂志》 (Medical Journal of Chinese People's Liberation Army)

年 卷 期：2022年第47卷第6期

页      面：569-578页

核心收录：

学科分类：1002[医学-临床医学] 100201[医学-内科学(含：心血管病、血液病、呼吸系病、消化系病、内分泌与代谢病、肾病、风湿病、传染病)] 10[医学] 

基　　金：浙江省医药卫生科技计划项目(2021KY358) 

主　　题：骨质疏松症 miR-181a TEN诱导激酶1/帕金森相关基因 自噬 破骨细胞 

摘      要：目的探讨miR-181a调控PTEN诱导激酶1(PINK1)/帕金森病相关基因(Parkin)通路对骨质疏松(OP)大鼠破骨细胞线粒体自噬的影响。方法健康雌性SD大鼠20只,随机分为OP模型组(n=10)与对照组(n=10)。OP模型组大鼠制备OP模型,提取OP大鼠破骨细胞,设置OP组(未转染)、si-miR-181a组(转染si-miR-181a载体质粒)、si-NC组(转染si-NC阴性对照质粒)、ad-miR-181a组(转染ad-miR-181a载体质粒)与ad-NC组(转染阴性ad-NC对照质粒),对照组大鼠破骨细胞正常培养,设为正常对照组。采用RT-PCR检测miR-181a的表达,MTT法及流式细胞术检测破骨细胞的存活及凋亡情况,透射电镜观察线粒体自噬情况,免疫荧光共定位检测线粒体中Parkin的表达情况,Western blotting检测PINK1/Parkin及自噬、凋亡相关蛋白的表达情况。敲低OP大鼠破骨细胞miR-181a后下调Parkin的表达,验证Parkin对miR-181a的逆转作用。双荧光素酶报告实验验证miR-181a与Parkin的靶向调控关系。结果与正常对照组相比,OP组破骨细胞中miR-181a(1.59±0.15 vs.1.02±0.11)、Parkin^(+)TOMM2^(+)(2.02±0.20 vs.0.13±0.10)、Parkin(1.83±0.18 vs.1.13±0.10)、PINK1(1.93±0.19 vs.1.03±0.10)表达水平,自噬标志蛋白LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.89±0.18 vs.1.15±0.10)及细胞存活率(157.06%±12.32%vs.100.09%±0.05%)升高(P0.05)。与OP组相比,上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(222.96%±22.15%)升高,Parkin^(+)TOMM2^(+)蛋白表达水平(1.01±0.11)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(1.36±0.12)及细胞凋亡率(3.28%±0.35%)降低(P0.05);下调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达后,细胞存活率(106.96%±10.15%)降低,Parkin^(+)TOMM2^(+)蛋白表达水平(2.97±0.29)、LC3-Ⅱ/Ⅰ比值(2.47±0.24)及细胞凋亡率(19.71%±1.83%)升高(P0.05)。双荧光素酶报告实验结果显示,Parkin为miR-181a的靶基因。下调Parkin的表达可逆转miR-181a低表达发挥的促进线粒体自噬及抑制细胞存活的作用(P0.05)。结论上调OP大鼠破骨细胞中miR-181a的表达可靶向下调Parkin的表达抑制线粒体自噬激活,促进破骨细胞存活。