四君子汤调节NKG2A表达影响NK细胞抗结肠癌作用

作     者：陈良燕 朱月伊 王鑫鑫 石晓兰 CHEN Liangyan;ZHU Yueyi;WANG Xinxin;SHI Xiaolan

作者机构：上海中医药大学附属普陀医院上海200062 

出 版 物：《中国实验方剂学杂志》 (Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae)

年 卷 期：2022年第28卷第15期

页      面：28-34页

核心收录：

学科分类：1006[医学-中西医结合] 1005[医学-中医学] 100501[医学-中医基础理论] 100601[医学-中西医结合基础] 100502[医学-中医临床基础] 10[医学] 100602[医学-中西医结合临床] 

基　　金：上海市普陀区卫生系统自主创新科研资助项目(重点项目)(ptkwws201804) 全国(上海市)名中医普陀传承工作室建设项目(ptzygzs2101)。 

主　　题：NK细胞 自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A) 组织相容性白细胞抗原E(HLA-E) 白细胞介素(IL)-15 结肠癌 四君子汤 

摘      要：目的:探讨中药复方四君子汤通过调节NKG2A的表达影响自然杀伤(NK)细胞抗结肠癌的作用。方法:分离、纯化来自健康人外周血NK细胞进行培养,分别构建人NK细胞单培、HCT116细胞单培和NK细胞与HCT116细胞共培模型,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测NK细胞中自然杀伤细胞2族成员A(NKG2A)、白细胞介素(IL)-15及结肠癌细胞中组织相容性白细胞抗原E(HLA-E)mRNA的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测NK细胞中IL-15分泌;噻唑蓝(MTT)比色法筛选IL-15的浓度,检测四君子汤和IL-15对NK细胞活性和共培模型中HCT116细胞活性的影响,Real-time PCR检测四君子汤和IL-15对NK细胞中NKG2A和HCT116中HLA-E mRNA表达的影响;使用Anti-NKG2A抗体(M)阻断NKG2A/HLA-E通路,MTT比色法检测共培模型中HCT116细胞增殖情况。结果:与单培组比较,NK细胞和HCT116细胞相互作用引起NK细胞的NKG2A和HCT116中的HLA-E mRNA表达均上调(P0.05);IL-15 mRNA表达和分泌也增加(P0.05);IL-15可增强NK细胞活性和抗结肠癌作用(P0.01),也可上调NKG2A表达(P0.05);与空白组比较,四君子汤组、四君子汤+IL-15组的NK细胞活性和抗结肠癌作用进一步增加(P0.01),Real-time PCR结果显示,与空白组比较,四君子汤组和四君子汤+IL-15组中NK细胞NKG2A表达下调(P0.05),共培模型中四君子汤组HCT116中HLA-E表达下调(P0.01);与相应未加M组比较,M组与IL-15+M组HCT116细胞增殖被抑制(P0.01)。结论:NK细胞与结肠癌细胞相互作用可引起NKG2A-HLAE通路活化导致NK功能受损,四君子汤可抑制该信号激活从而恢复NK细胞抗结肠癌作用。